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NcTarget™ 사람 만능줄기세포(hPSC) 배양 배지

NcTarget™ hPSC Medium · Cat. No. RP01020

영양세포(feeder) 없이 사람 배아줄기세포(hESC)·유도만능줄기세포(hiPSC)를 키우는 무혈청 배지입니다. 기저 배지와 보충제 A·B를 섞어 500 mL를 만듭니다.

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Shownin · hPSC · 배양 배지
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500 mL (1 Kit)

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개요

NcTarget™ hPSC Medium(RP01020)은 사람 만능줄기세포(hPSC, human pluripotent stem cell), 즉 사람 배아줄기세포(hESC)와 사람 유도만능줄기세포(hiPSC)를 영양세포(feeder) 없이 확장 배양하기 위한 배지입니다. 공식 제품 페이지는 이 배지를 영양세포 무사용(feeder-free)·이종 성분 무첨가(xeno-free) 배지로, 설명서는 무혈청(serum-free)·화학적 조성 확정(chemically defined) 배지로 소개합니다.

설명서에 따르면 hPSC는 이 배지에서 빠르게 증식하고 분화된 세포는 느리게 자라므로, hPSC를 선택적으로 늘려 순도 높은 세포를 얻을 수 있습니다(제조사 설명).

배양 기질은 Vitronectin(RP01002), ncLaminin511(RP01025) 또는 Matrigel과 함께 사용할 수 있습니다(공식 제품 페이지). 계대에는 0.5 mM EDTA가 든 hPSC Dissociation Buffer와 ROCK 억제제 Blebbistatin을 함께 쓰는 절차가 설명서에 나와 있습니다.

주요 용도

  • 사람 배아줄기세포(hESC)·사람 유도만능줄기세포(hiPSC)의 영양세포 없는 유지·확장 배양
  • EDTA 해리를 이용한 hPSC 덩어리(cluster) 계대 배양
  • 다른 영양세포 무사용 배지에서 키우던 hPSC의 배양 전환(설명서 '다른 배지에서 전환' 절차)

특징

  • 무혈청(serum-free) 배지입니다(공식 제품 페이지).
  • 영양세포 없이(feeder-free) 배양합니다(공식 제품 페이지).
  • hPSC의 2D 및 3D 배양·확장에 쓸 수 있다고 제조사가 표기합니다(공식 제품 페이지). 공개 설명서에는 2D(6-well plate) 절차만 나와 있습니다.
  • 기저 배지 400 mL + Supplement A 20 mL + Supplement B 80 mL로 완전 배지 500 mL를 만들며, 완전 배지는 2–8 °C에서 2주까지 보관합니다(공식 제품 페이지·설명서).
  • 설명서 기준 계대 주기는 접종 후 4–5일, 권장 계대 비율은 1:10(세포 상태에 따라 1:5–1:20)입니다.

구성 · 사양

구성
구성품 (영문 표기)Cat. No.용량수량보관
NcTarget™ hPSC Medium Basal MediumRP01020-01400 mL12–8 °C
NcTarget™ hPSC Medium Supplement ARP01020-A20 mL1-80 °C 또는 -20 °C
NcTarget™ hPSC Medium Supplement BRP01020-B80 mL1-80 °C 또는 -20 °C
대상 세포사람 만능줄기세포(hESC, hiPSC)
배양 방식영양세포 무사용(feeder-free), 2D·3D 배양 (제조사 표기)
주요 성분 특성무혈청 · 이종 성분 무첨가 · 화학적 조성 확정 (제조사 표기)
함께 쓰는 배양 기질Vitronectin, ncLaminin511, Matrigel (공식 제품 페이지)
완전 배지 조성Basal Medium 400 mL + Supplement A 20 mL + Supplement B 80 mL = 500 mL

사용 방법

함께 준비할 것

  • 배양 기질: Vitronectin — 코팅용. ncLaminin511 또는 Matrigel도 사용 가능 (공식 제품 페이지)
  • 배양 기질: ncLaminin511 — 코팅용 (공식 제품 페이지)
  • hPSC Dissociation Buffer — EDTA 계대·동결 전 해리 (설명서 권장 품목)
  • ROCK 억제제 Blebbistatin (10 mM) — 해동·계대 후 완전 배지에 1:4000 첨가 (설명서 권장 품목)
  • hPSC Cryopreservation Medium — hPSC 동결 (설명서 권장 품목)
  • DMEM/F12 배지 — Matrigel 희석, 해동 시 세척 (설명서)
  • DPBS (칼슘·마그네슘 무첨가) — 계대·동결 전 세척 (설명서)
  • 6-well plate, 피펫, 15/50 mL 원심분리 튜브, 1.5/2 mL 동결 바이알, 세포 동결 용기 — 설명서 표 2

완전 배지 만들기

  1. NcTarget™ Supplement A·B를 4 °C에서 녹입니다. 37 °C에서 녹이지 않습니다.
  2. 생물안전작업대에서 Basal Medium 400 mL, Supplement A 20 mL, Supplement B 80 mL를 섞어 완전 배지 500 mL를 만듭니다(100 mL는 80 / 4 / 16 mL, 50 mL는 40 / 2 / 8 mL).
  3. 완전 배지는 4 °C에 두고 2주 안에 씁니다. 보충제는 사용량에 맞춰 나눠 얼리고 얼렸다 녹이기를 2회 넘기지 않습니다.
  4. 배지는 그때그때 필요한 양만 데워 온도 변화와 성분 분해를 줄입니다.

Matrigel 코팅 (6-well plate 예)

  1. 권장 코팅 농도는 0.013 mg/cm²입니다. Matrigel 3 mg 1개 분량이 6-well plate 4장에 해당합니다.
  2. 4 °C에서 녹인 Matrigel 3 mg에 차가운 DMEM/F12 1 mL를 넣어 섞은 뒤, 차가운 DMEM/F12 36 mL가 든 50 mL 튜브에 옮겨 고루 섞습니다.
  3. 6-well plate 4장에 1.5 mL/well씩 넣고 고르게 펴지게 기울입니다.
  4. 실온에서 1시간 또는 4 °C에서 하룻밤 둔 뒤 씁니다. 4 °C에서 2주 안에 쓸 수 있습니다.

hPSC 해동

  1. 코팅한 6-well plate를 생물안전작업대에서 1시간 두어 실온(15–30 °C)으로 맞춥니다.
  2. 완전 배지 4 mL에 Blebbistatin(10 mM) 1 µL(1:4000)를 넣고 실온으로 맞춥니다. 37 °C 수조에서 데우지 않습니다.
  3. 동결 바이알을 37 °C 수조에서 얼음 결정이 거의 사라질 때까지(1분 이내) 녹입니다.
  4. 세포를 15 mL 튜브로 옮기고 DMEM/F12 10 mL를 천천히 넣어 섞은 뒤 160 × g에서 5분 원심분리합니다.
  5. 상층액을 버리고 Blebbistatin을 넣은 완전 배지 4 mL에 부드럽게 현탁해, 코팅액을 뺀 2개 well에 2 mL/well씩 접종합니다.
  6. 판을 가로·세로로 3회 흔들어 고루 펴고 37 °C, 5% CO₂ 배양기에 넣은 뒤 다시 3회 흔듭니다.
  7. 18–24시간 뒤 새 완전 배지로 바꾸고, 이후 매일 배지를 교체합니다.

EDTA 계대 (6-well plate 예)

  1. 세포 밀도가 약 85%일 때(보통 접종 4일 후) 계대합니다. 밀도가 낮아도 5일을 넘겨 배양하지 않습니다. 계대 비율은 1:5–1:20, 상태가 좋으면 1:10을 권장합니다.
  2. 코팅한 판을 약 1시간 실온(~25 °C)에 둡니다. 완전 배지 2 mL/well에 Blebbistatin(10 mM)을 1:4000(2 mL당 0.5 µL)으로 넣어 실온으로 맞춥니다.
  3. 배지를 빼고 칼슘·마그네슘이 없는 DPBS 2 mL/well로 가볍게 헹군 뒤 뺍니다.
  4. hPSC Dissociation Buffer 2 mL/well을 넣고 37 °C 배양기에서 7–8분 둡니다. 대부분의 세포가 밝고 둥글어졌지만 아직 떨어지지 않았을 때 멈춥니다.
  5. 판을 흔들지 않고 꺼내 해리 버퍼를 빼고, Blebbistatin을 넣은 완전 배지 2 mL/well을 바로 넣어 판을 가로·세로로 흔들어 세포를 떼어 냅니다. 피펫팅은 1–2회만 하고 긁지 않습니다.
  6. 세포가 EDTA 버퍼에 15분 넘게 머물지 않게 하고, 한 번에 6-well plate 1장만 다룹니다.
  7. 새 코팅 판의 코팅액을 빼고 Blebbistatin을 넣은 완전 배지 2 mL/well을 넣은 뒤, 정한 비율대로 세포 현탁액을 나눠 넣습니다.
  8. 판을 가로·세로로 3회 흔들어 배양기에 넣고, 18–24시간 뒤 새 완전 배지로 바꿉니다. 이후 매일 배지를 바꾸고 4–5일 뒤 다시 계대하거나 동결합니다.

hPSC 동결과 배지 전환

  1. 세포 밀도가 약 85%일 때 동결합니다. 보통 6-well plate 1 well에서 살아 있는 세포 2–4 × 10⁶개를 얻어 바이알 1개에 얼립니다.
  2. hPSC 동결 배지를 실온으로 맞추고 잘 섞습니다(DMSO가 바닥에 가라앉기 쉬움).
  3. DPBS 2 mL/well로 헹군 뒤 hPSC Dissociation Buffer 2 mL/well로 37 °C에서 7–8분 해리하고 버퍼를 뺍니다.
  4. 동결 배지 1 mL/well을 넣어 부드럽게 현탁하고 1.5/2 mL 동결 바이알로 옮깁니다.
  5. 세포 동결 용기에 넣어 -80 °C에서 하룻밤 둔 뒤 다음 날 액체질소로 옮깁니다(또는 프로그램 냉동기 사용).
  6. 다른 영양세포 무사용 배지에서 옮길 때는 기존 배지로 계대하고 24시간 뒤 기존 배지와 NcTarget™ 완전 배지를 1:1로 섞은 배지로 바꾸고, 이 혼합 배지로 2회 계대한 뒤 NcTarget™ 완전 배지로 완전히 바꿉니다. 2–3회 계대하면 적응하며, 적응 후 동결할 수 있습니다.
  7. 자세한 절차와 문제 해결은 제품 설명서를 확인하세요.
완전 배지 조제량 (설명서 표 3)
구성품500 mL100 mL50 mL
NcTarget™ Basal Medium400 mL80 mL40 mL
NcTarget™ Supplement A20 mL4 mL2 mL
NcTarget™ Supplement B80 mL16 mL8 mL
배양 용기별 시약 사용량 (설명서 표 3)
배양 용기배양 면적DPBShPSC Dissociation BufferhPSC 완전 배지*
6-well plate9.6 cm²/well2 mL/well2 mL/well2 mL/well
12-well plate4.5 cm²/well1 mL/well1 mL/well1 mL/well
24-well plate2 cm²/well0.5 mL/well0.5 mL/well0.5 mL/well
35 mm 배양 접시8 cm²2 mL2 mL2 mL

* 세포 밀도(confluence)가 50%를 넘으면 배지를 50% 더 넣는 것을 권장합니다. 예: 6-well plate 배지 교체 시 3 mL/well (설명서).

제품 설명서의 절차를 한국어로 요약했습니다. 실제 작업은 제품 설명서 원문과 소속 기관의 절차를 따르세요.

제조사 시험 자료

NcTarget™ 배양 hiPSC의 형태와 만능성 확인
NcTarget™ 배양 hiPSC의 형태와 만능성 확인A, B, C: NcTarget™ hPSC Medium으로 계속 배양한 hiPSC 세포주의 형태(scale bar 200 µm). D: 세포 표면 표지자 SSEA4, TRA-1-81의 유세포 분석 히스토그램(양성). E: 만능성 유전자 OCT4·NANOG의 상대 발현량 막대그래프로, hESC를 1.0으로 두었을 때 hiPSC(P20)는 OCT4 약 1.4, NANOG 약 1.2이고 MSC는 거의 0입니다(그림에서 읽은 근사값). F: 계속 배양한 hiPSC(P30)의 핵형 분석 결과 46, XY.시험 조건: 세포: hiPSC 세포주, NcTarget™ hPSC Medium 장기 연속 배양 / 확인 항목: 형태, SSEA4·TRA-1-81 유세포 분석, OCT4·NANOG 상대 발현(hESC 기준, MSC 대조), 핵형(P30) / 배양 기질은 그림 설명에 없음 (제조사 시험)
영문 원문 설명

A, B, C: The morphology of continuously cultured hiPSC cell lines. Scale bar: 200 μm. D: Flow cytometry analysis of cell surface marker (SSEA4+, Tra-1-81+). E: Flow cytometry analysis cell pluripotency gene detection (OCT4+, NANOG+). F: karyotype detection (46, XY) of continuously cultured hiPSC (P30) cells.

출처: 공식 제품 페이지

제조사가 공개한 시험 결과입니다. 표시한 시료 · 조건에서 얻은 값이며, 사용하시는 세포 · 공정에서 같은 결과를 보장하지 않습니다.

보관 · 취급

  • Basal Medium: 2–8 °C
  • Supplement A·B: -80 °C 또는 -20 °C
  • Supplement A·B는 4 °C에서 녹입니다(37 °C에서 녹이지 않음). 사용량에 맞춰 나눠 얼리고, 얼렸다 녹이기는 2회를 넘기지 않습니다(설명서).
  • 완전 배지: 2–8 °C에서 2주까지 (공식 제품 페이지·설명서)

자료 · 영상

COA(시험성적서)는 제품 라벨의 REF(품목코드) · LOT(로트)로 Shownin 공식 COA 조회에서 찾거나 비투바이오에 요청해 주세요. 모든 Shownin 자료는 Shownin 자료실에 있습니다.

인용 논문

  1. Embryonic Stem Cell Derived Small Extracellular Vesicles Modulate Regulatory T Cells to Protect against Ischemic StrokeYuguo Xia, et al. ACS Nano, 2021
  2. A splenic-targeted versatile antigen courier: iPSC wrapped in coalescent erythrocyte-liposome as tumor nanovaccineYuewen Zhai, et al. Science Advances, 2021
  3. miR143-3p–Mediated NRG-1–Dependent Mitochondrial Dysfunction Contributes to Olanzapine Resistance in Refractory SchizophreniaJing Sun, et al. Biological Psychiatry, 2022
  4. Development of a high-throughput micropatterned agarose scaffold for consistent and reproducible hPSC-derived liver organoidsShanqing Jiang, et al. Biofabrication, 2022

제조사가 공식 사이트에 공개한 사용 논문 목록입니다.

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