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ROCK 억제제 Blebbistatin (비근육 미오신 II 억제제)

ROCK Inhibitor-Blebbistatin · Cat. No. RP01008

비근육 미오신 II(non-muscle myosin II) ATPase 억제제입니다. hPSC 계대 · 해동 때 완전 배지에 최종 2.5 µM로 넣습니다(공식 Features · 설명서).

ROCK Inhibitor-Blebbistatin 제품 사진
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3 mg (1 mL)
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개요

Blebbistatin은 널리 쓰이는 비근육 미오신 II(non-muscle myosin II) ATPase 억제제입니다(공식 Overview).

설명서에 따르면 ROCK-미오신 II 신호 경로에 작용해, 다능성 줄기세포(PSC)를 단일세포로 분리할 때 생기는 세포 사멸(apoptosis)을 막습니다. 분리한 인간 다능성 줄기세포(hPSC)의 생존율과 클로닝 효율을 높이면서 자기재생능과 다능성을 유지합니다.

10 mM DMSO 용액으로 공급되며, hPSC 계대 당일에는 완전 배지에 최종 2.5 µM(완전 배지 2 mL에 0.5 µL)로 넣습니다. 24시간 뒤에는 Blebbistatin이 없는 완전 배지로 바꿉니다(설명서). 배아체(embryoid body) 형성 실험에는 10 µM을 권장합니다(설명서).

주요 용도

  • hPSC 계대 당일 완전 배지 첨가 (최종 2.5 µM)
  • 동결 hPSC 해동 후 재배양 시 첨가 (NcEpic™ · hPSC Cryopreservation Medium 설명서, 1:4000 희석)
  • 배아체(embryoid body) 형성 실험 (10 µM)
  • hPSC 분화 키트 절차에서 단일세포 계대 시 생존 보조 (각 키트 설명서 권장 시약)

특징

  • hPSC 계대와 회복(해동)에 최종 2.5 µM만 사용 (공식 Features)
  • 비근육 미오신 II ATPase 억제제, ROCK-미오신 II 경로 작용 (공식 Overview · 설명서)
  • 단일세포로 분리한 hPSC의 생존율과 클로닝 효율 향상, 자기재생능 · 다능성 유지 (설명서)
  • 10 mM DMSO 용액 3 mg (1 mL) 공급 (설명서)
  • 배아체(EB) 형성 실험에는 10 µM 권장 (설명서)

구성 · 사양

구성
구성품 (영문 표기)Cat. No.용량수량보관
Blebbistatin (10 mM, DMSO 용액)RP010083 mg (1 mL)1-20 °C
형태10 mM DMSO 용액, 3 mg (1 mL)
작용비근육 미오신 II ATPase 억제 (ROCK-미오신 II 경로)
hPSC 계대 농도최종 2.5 µM (완전 배지 2 mL에 0.5 µL) (설명서)
해동 시 사용완전 배지 4 mL에 10 mM 원액 1 µL (1:4000) (hPSC Cryopreservation Medium 설명서)
배아체 형성10 µM 권장 (설명서)
보관-20 °C 차광 6개월 / 4 °C 차광 1개월 (설명서)

사용 방법

함께 준비할 것

hPSC 계대 시 사용

  1. 계대 당일, hPSC 완전 배지에 Blebbistatin을 최종 2.5 µM로 넣습니다(완전 배지 2 mL에 10 mM 원액 0.5 µL).
  2. 이 배지로 세포를 접종하면 배양면 부착이 좋아집니다(설명서 그림 1-A).
  3. 24시간 뒤 Blebbistatin이 없는 hPSC 완전 배지로 바꾸고, 평소 조건으로 배양합니다(설명서 그림 1-B).

동결 세포 해동 시 사용

  1. hPSC 완전 배지(NcEpic 또는 NcTarget) 4 mL에 Blebbistatin(10 mM) 1 µL를 넣습니다(1:4000).
  2. 배지를 실온(15–30 °C)으로 맞춥니다. 37 °C 수조에서 데우지 않습니다.
  3. 해동 · 원심한 세포를 이 배지로 재부유해 Vitronectin 코팅 plate에 접종합니다.
  4. 18–24시간 뒤 새 완전 배지로 교체합니다.

배아체(EB) 형성 실험

  1. 배아체 형성 실험에서는 Blebbistatin 농도 10 µM을 권장합니다.
  2. 자세한 절차는 제품 설명서를 따릅니다.

제품 설명서의 절차를 한국어로 요약했습니다. 실제 작업은 제품 설명서 원문과 소속 기관의 절차를 따르세요.

제조사 시험 자료

Blebbistatin(2.5 µM)으로 계대한 hiPSC의 형태
Blebbistatin(2.5 µM)으로 계대한 hiPSC의 형태Blebbistatin 2.5 µM으로 계대한 hiPSC(P18)의 형태입니다. A, B, C: 배양 1일, 2일, 3일째. Scale bar: 200 µm.시험 조건: hiPSC 18계대(P18), Blebbistatin 최종 2.5 µM으로 계대. 위상차 현미경 사진. 배지·기질은 그림 설명에 없음. 제조사 시험 결과
영문 원문 설명

The morphology of hiPSCs (P18) passaged with Blebbistatin (2.5 μM). A, B, and C: hiPSC cultured for 1, 2, and 3 days. Scale bar: 200 μm.

출처: 공식 제품 페이지

제조사가 공개한 시험 결과입니다. 표시한 시료 · 조건에서 얻은 값이며, 사용하시는 세포 · 공정에서 같은 결과를 보장하지 않습니다.

보관 · 취급

  • 보관 -20 °C (공식 제품 페이지)
  • -20 °C에서 빛을 피해 보관하고 반복 동결 · 해동을 피하면 6개월 안정 (설명서)
  • 4 °C에서는 빛을 피해 최대 1개월 (설명서)

자료 · 영상

사용법 영상 (Shownin 공식 YouTube)

iPSC 해동Shownin iPSC Product System Usage Protocols: Thawing YouTube에서 보기

COA(시험성적서)는 제품 라벨의 REF(품목코드) · LOT(로트)로 Shownin 공식 COA 조회에서 찾거나 비투바이오에 요청해 주세요. 모든 Shownin 자료는 Shownin 자료실에 있습니다.

인용 논문

  1. Transplantation of GMP-grade human iPSC-derived retinal pigment epithelial cells in rodent model - the first pre-clinical study for safety and efficacy in ChinaHang Zhang, et al. Annals of Translational Medicine, 2021
  2. Establishment of an induced pluripotent stem cell line from a patient with hereditary transthyretin amyloidosis carrying transthyretin (TTR) mutation p.Phe53ValHe Shan, et al. Stem Cell Research, 2020
  3. Establishment of an induced pluripotent stem cell line PUMCHi004-A from a hereditary transthyretin amyloid cardiomyopathy patient with transthyretin (TTR) p.Asp38Asn mutationHe Shan, et al. Stem Cell Research, 2020

제조사가 공식 사이트에 공개한 사용 논문 목록입니다.

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