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NcEpic™ 사람 만능줄기세포(hPSC) 배양 배지

NcEpic™ hPSC Medium · Cat. No. SN-01-0010

영양세포 없이 hESC·hiPSC를 키우는 화학적 조성 확정 배지입니다. 기저 배지 496 mL에 125× 보충제 4 mL를 섞어 씁니다.

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Shownin · hPSC · 배양 배지
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500 mL (1 Kit)
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개요

NcEpic™ hPSC Medium(SN-01-0010)은 사람 만능줄기세포(hPSC), 즉 사람 배아줄기세포(hESC)와 사람 유도만능줄기세포(hiPSC)를 확장 배양하기 위한 배지입니다. 영양세포 무사용(feeder-free), 이종 성분 무첨가(xeno-free), 화학적 조성 확정(chemically defined) 배지이며, 설명서는 동물 단백질 무첨가(animal protein-free) 배지로도 소개합니다.

설명서에 따르면 hPSC는 이 배지에서 빠르게 증식하고 분화된 세포는 느리게 자라므로, hPSC를 선택적으로 늘려 순도 높은 세포를 얻을 수 있습니다(제조사 설명).

기저 배지(Basal Medium) 496 mL와 125× 보충제(Supplement) 4 mL 두 가지만 섞으면 완전 배지가 됩니다. 배양 기질은 Vitronectin(RP01002), ncLaminin511(RP01025) 또는 Matrigel과 함께 사용할 수 있습니다(공식 제품 페이지).

주요 용도

  • 사람 배아줄기세포(hESC)·사람 유도만능줄기세포(hiPSC)의 영양세포 없는 유지·확장 배양
  • Vitronectin 또는 Matrigel 코팅 판에서의 EDTA 덩어리 계대 배양 (설명서)
  • 다른 영양세포 무사용 배지에서 키우던 hPSC의 배양 전환 (설명서)

특징

  • 30계대 넘게 세포 안정성을 유지한다고 제조사가 표기합니다(공식 제품 페이지). 공식 그림에서는 P30 hiPSC의 핵형 분석 결과(46, XX)을 보여 줍니다.
  • 영양세포 무사용(feeder-free) 배지입니다(공식 제품 페이지).
  • 이종 성분 무첨가(xeno-free) 배지입니다(공식 제품 페이지).
  • 화학적 조성 확정(chemically defined) 배지입니다(공식 제품 페이지).
  • 구성이 두 가지(Basal Medium 496 mL + 125× Supplement 4 mL)이며, 완전 배지는 2–8 °C에서 2주까지 보관합니다(공식 제품 페이지·설명서).

구성 · 사양

구성
구성품 (영문 표기)Cat. No.용량수량보관
NcEpic™ hPSC Medium Basal MediumSN-01-0011496 mL12–8 °C
NcEpic™ hPSC Medium 125× SupplementSN-01-00124 mL1-80 °C 또는 -20 °C
대상 세포사람 만능줄기세포(hESC, hiPSC)
배양 방식영양세포 무사용(feeder-free)
주요 성분 특성이종 성분 무첨가 · 화학적 조성 확정 · 동물 단백질 무첨가 (제조사 표기)
함께 쓰는 배양 기질Vitronectin, ncLaminin511, Matrigel (공식 제품 페이지)
완전 배지 조성Basal Medium 496 mL + 125× Supplement 4 mL = 500 mL (100 mL는 99.2 mL + 0.8 mL)

사용 방법

함께 준비할 것

  • 배양 기질: Vitronectin — 코팅용, 설명서 기본 절차 (설명서 권장 품목). ncLaminin511 또는 Matrigel도 사용 가능 (공식 제품 페이지)
  • 배양 기질: ncLaminin511 — 코팅용 (공식 제품 페이지)
  • hPSC Dissociation Buffer — EDTA 계대·동결 전 해리 (설명서 권장 품목)
  • ROCK 억제제 Blebbistatin (10 mM) — 해동·계대 후 완전 배지에 1:4000 첨가 (설명서 권장 품목)
  • hPSC Cryopreservation Medium — hPSC 동결 (설명서 권장 품목)
  • DMEM/F12 배지 — 코팅액 희석, 해동 시 세척 (설명서)
  • DPBS (칼슘·마그네슘 무첨가) — 계대·동결 전 세척 (설명서)
  • 6-well plate, 피펫, 15/50 mL 원심분리 튜브, 1.5/2 mL 동결 바이알, 세포 동결 용기 — 설명서 표 2

완전 배지 만들기

  1. NcEpic™ hPSC Medium Supplement를 4 °C에서 녹입니다. 37 °C에서 녹이지 않습니다.
  2. 생물안전작업대에서 Basal Medium 496 mL와 Supplement 4 mL를 섞어 완전 배지 500 mL를 만듭니다.
  3. 나눠 쓰려면 Supplement를 0.8 mL씩 5개로 나눠 얼리고, 1개를 녹여 Basal Medium 99.2 mL와 섞어 100 mL를 만듭니다.
  4. 완전 배지는 4 °C에 두고 2주 안에 씁니다. 그때그때 필요한 양만 데웁니다.

Vitronectin 코팅 (6-well plate 예)

  1. Vitronectin을 실온(15–25 °C)에서 녹입니다. 녹인 뒤에는 4 °C에서 2주까지 두거나, 나눠서 -20 °C/-80 °C에 보관합니다.
  2. 6-well plate(10 cm²/well) 1장에 60 µg(500 µg/mL 원액 120 µL)을 씁니다. 120 µL씩 나눠 얼려 두면 편합니다.
  3. 120 µL(60 µg) 1개를 DMEM/F12 9 mL에 넣어 부드럽게 섞습니다(볼텍스 금지).
  4. 1.5 mL/well씩 넣고 고르게 펴지게 기울인 뒤 실온(15–25 °C)에서 1시간 이상 둡니다.
  5. 쓰기 직전에 코팅액을 빼고 바로 씁니다(추가 세척 불필요, 바닥을 긁지 않음). 밀봉해 4 °C에서 1주까지 둘 수 있고, 쓰기 전 실온에 10–30분 둡니다. 코팅액이 마르면 세포 부착이 나빠집니다.

Matrigel 코팅 (6-well plate 예)

  1. 권장 코팅 농도는 0.013 mg/cm²로, 6-well plate(9.6 cm²/well) 1장에 0.75 mg입니다. 3 mg 1개 분량이 4장에 해당합니다.
  2. 4 °C에서 녹인 Matrigel 3 mg에 차가운 DMEM/F12 1 mL를 넣어 섞은 뒤, 차가운 DMEM/F12 36 mL가 든 50 mL 튜브에 옮겨 고루 섞습니다.
  3. 6-well plate 4장에 1.5 mL/well씩 넣고 고르게 펴지게 기울입니다.
  4. 실온에서 1시간 또는 4 °C에서 하룻밤 둔 뒤 씁니다. 4 °C에서 2주 안에 쓸 수 있습니다.

hPSC 해동

  1. 코팅한 6-well plate를 생물안전작업대에서 1시간 두어 실온(15–30 °C)으로 맞춥니다.
  2. 완전 배지 4 mL에 Blebbistatin(10 mM) 1 µL(1:4000)를 넣고 실온으로 맞춥니다. 37 °C 수조에서 데우지 않습니다.
  3. 동결 바이알을 37 °C 수조에서 얼음 결정이 거의 사라질 때까지(1분 이내) 녹입니다.
  4. 세포를 15 mL 튜브로 옮기고 DMEM/F12 10 mL를 천천히 넣어 섞은 뒤 160 × g에서 5분 원심분리합니다.
  5. 상층액을 버리고 Blebbistatin을 넣은 완전 배지 4 mL에 부드럽게 현탁해, 코팅액을 뺀 2개 well에 2 mL/well씩 접종합니다.
  6. 판을 가로·세로로 3회 흔들어 37 °C, 5% CO₂ 배양기에 넣고 다시 3회 흔듭니다. 18–24시간 뒤 새 완전 배지로 바꾸고, 이후 매일 교체합니다.

EDTA 계대 (6-well plate 예)

  1. 세포 밀도가 약 85%일 때(보통 접종 4일 후) 계대합니다. 밀도가 낮아도 5일을 넘겨 배양하지 않습니다. 계대 비율은 1:5–1:20, 상태가 좋으면 1:10을 권장합니다.
  2. Vitronectin 코팅 판을 약 1시간 실온(~25 °C)에 둡니다. 완전 배지 2 mL/well에 Blebbistatin(10 mM)을 1:4000(2 mL당 0.5 µL)으로 넣어 실온으로 맞춥니다.
  3. 배지를 빼고 칼슘·마그네슘이 없는 DPBS 2 mL/well로 가볍게 헹군 뒤 뺍니다.
  4. hPSC Dissociation Buffer 2 mL/well을 넣고 37 °C 배양기에서 7–8분 둡니다. 대부분의 세포가 밝고 둥글어졌지만 아직 떨어지지 않았을 때 멈춥니다.
  5. 판을 흔들지 않고 꺼내 해리 버퍼를 빼고, Blebbistatin을 넣은 완전 배지 2 mL/well을 바로 넣어 판을 가로·세로로 흔들어 세포를 떼어 냅니다. 피펫팅은 1–2회만 하고 긁지 않습니다(10–15%가 남는 것은 정상).
  6. 세포가 해리 버퍼에 15분 넘게 머물지 않게 하고, 한 번에 6-well plate 1장만 다룹니다.
  7. 새 코팅 판의 코팅액을 빼고 Blebbistatin을 넣은 완전 배지 2 mL/well을 넣은 뒤, 정한 비율대로 세포 현탁액을 나눠 넣습니다.
  8. 판을 가로·세로로 3회 흔들어 배양기에 넣고, 18–24시간 뒤 새 완전 배지로 바꿉니다. 이후 매일 교체하고 4–5일 뒤 다시 계대하거나 동결합니다.

hPSC 동결과 배지 전환

  1. 세포 밀도가 약 85%일 때 동결합니다. 보통 6-well plate 1 well에서 살아 있는 세포 2–4 × 10⁶개를 바이알 1개에 얼립니다.
  2. hPSC Cryopreservation Medium을 실온으로 맞추고 잘 섞습니다(DMSO가 바닥에 가라앉기 쉬움). DPBS로 헹군 뒤 hPSC Dissociation Buffer 2 mL/well로 37 °C에서 7–8분 해리하고 버퍼를 뺍니다.
  3. 동결 배지 1 mL/well로 부드럽게 현탁해 동결 바이알로 옮기고, 세포 동결 용기에 넣어 -80 °C에서 하룻밤 둔 뒤 다음 날 액체질소로 옮깁니다.
  4. 다른 영양세포 무사용 배지에서 옮길 때는 기존 배지와 NcEpic™ 완전 배지를 1:1로 섞어 2회 배지 교체한 뒤, NcEpic™ 완전 배지로 2–3회 계대해 적응시킵니다.
  5. 자세한 절차와 문제 해결은 제품 설명서를 확인하세요.
배양 용기별 시약 사용량 (설명서 표 3)
배양 용기배양 면적DPBShPSC Dissociation BufferhPSC 완전 배지*
6-well plate9.6 cm²/well2 mL/well2 mL/well2 mL/well
12-well plate4.5 cm²/well1 mL/well1 mL/well1 mL/well
24-well plate2 cm²/well0.5 mL/well0.5 mL/well0.5 mL/well
35 mm 배양 접시8 cm²2 mL2 mL2 mL

* 세포 밀도(confluence)가 50%를 넘으면 배지를 50% 더 넣는 것을 권장합니다. 예: 6-well plate 배지 교체 시 3 mL/well (설명서).

제품 설명서의 절차를 한국어로 요약했습니다. 실제 작업은 제품 설명서 원문과 소속 기관의 절차를 따르세요.

제조사 시험 자료

NcEpic™ 배양 hiPSC의 형태와 만능성 확인
NcEpic™ 배양 hiPSC의 형태와 만능성 확인A, B, C: NcEpic™ hPSC Medium으로 계속 배양한 hiPSC 세포주의 형태(scale bar 200 µm). D: 세포 표면 표지자 SSEA4, TRA-1-81의 유세포 분석 히스토그램(양성). E: 만능성 유전자 OCT4·NANOG의 상대 발현량 막대그래프로, hESC를 1.0으로 두었을 때 hiPSC(P20)는 OCT4 약 1.3, NANOG 약 1.15이고 MSC는 거의 0입니다(그림에서 읽은 근사값). F: 계속 배양한 hiPSC(P30)의 핵형 분석 결과 46, XX.시험 조건: 세포: hiPSC 세포주, NcEpic™ hPSC Medium 장기 연속 배양 / 확인 항목: 형태, SSEA4·TRA-1-81 유세포 분석, OCT4·NANOG 상대 발현(hESC 기준, MSC 대조), 핵형(P30) / 배양 기질은 그림 설명에 없음 (제조사 시험)
영문 원문 설명

A, B, C: The morphology of continuously cultured hiPSC cell lines. Scale bar: 200 μm. D: Flow cytometry analysis of cell surface marker (SSEA4+, Tra-1-81+). E: Flow cytometry analysis cell pluripotency gene detection (OCT4+, NANOG+). F: karyotype detection (46, XX) of continuously cultured hiPSC (P30) cells.

출처: 공식 제품 페이지

제조사가 공개한 시험 결과입니다. 표시한 시료 · 조건에서 얻은 값이며, 사용하시는 세포 · 공정에서 같은 결과를 보장하지 않습니다.

보관 · 취급

  • Basal Medium: 2–8 °C
  • 125× Supplement: -80 °C 또는 -20 °C. 4 °C에서 녹이고(37 °C 금지), 필요하면 0.8 mL씩 나눠 얼립니다. 얼렸다 녹이기는 2회를 넘기지 않습니다(설명서).
  • 완전 배지: 2–8 °C에서 2주까지 (공식 제품 페이지·설명서)

자료 · 영상

사용법 영상 (Shownin 공식 YouTube)

iPSC 배양 — Vitronectin 코팅Shownin iPSC Product System Usage Protocols: Vitronectin YouTube에서 보기
iPSC 해동Shownin iPSC Product System Usage Protocols: Thawing YouTube에서 보기
iPSC 계대Shownin iPSC Product System Usage Protocols: Passaging YouTube에서 보기

COA(시험성적서)는 제품 라벨의 REF(품목코드) · LOT(로트)로 Shownin 공식 COA 조회에서 찾거나 비투바이오에 요청해 주세요. 모든 Shownin 자료는 Shownin 자료실에 있습니다.

인용 논문

  1. Base editing-mediated splicing correction therapy for spinal muscular atrophyXiang Lin, et al. Cell Research, 2020
  2. Disruption of splicing-regulatory elements using CRISPR/Cas9 to rescue spinal muscular atrophy in human iPSCs and miceJinjing Li, et al. National Science Review, 2019
  3. Inducible Pluripotent Stem Cell-Derived Small Extracellular Vesicles Rejuvenate Senescent Blood-Brain Barrier to Protect against Ischemic Stroke in Aged MiceQing Li, et al. ACS Nano, 2022
  4. ESC-sEVs Rejuvenate Senescent Hippocampal NSCs by Activating Lysosomes to Improve Cognitive Dysfunction in Vascular DementiaGuowen Hu, et al. Advanced Science, 2020
  5. Human ESC-sEVs alleviate age-related bone loss by rejuvenating senescent bone marrow-derived mesenchymal stem cellsLiangzhi Gong, et al. Journal of Extracellular Vesicles, 2020
  6. ESC-sEVs Rejuvenate Aging Hippocampal NSCs by Transferring SMADs to Regulate the MYT1-Egln3-Sirt1 AxisGuowen Hu Molecular Therapy, 2021

제조사가 공식 사이트에 공개한 사용 논문 목록입니다.

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