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hPSC-MSC 분화 키트 (다능성 줄기세포 → 중간엽 줄기세포)

hPSC-MSC Differentiation Kit · Cat. No. RP01013

인간 다능성 줄기세포(hPSC)를 단계별 배지 5종으로 약 14일 분화시켜 중간엽 줄기세포(MSC)를 얻는 키트입니다. 키트 1개로 P0 MSC 약 2 × 10⁷개(설명서).

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개요

hPSC-MSC Differentiation Kit는 인간 다능성 줄기세포(hPSC)에서 중간엽 줄기세포(MSC)를 효율적으로 분화시키도록 만든 키트입니다. 기저 배지(Basal Medium) 1종과 단계별 보충제(Supplement) A–E로 구성되며, 보충제를 바꿔 가며 단계적으로 분화를 유도합니다.

제조사에 따르면 이 키트로 얻은 MSC(hPSC-MSC)는 안정적으로 증식하고 정상 핵형을 보이며, MSC 특이 표면 표지자(CD73+/CD90+/CD105+, CD14-/CD34-/CD45-/CD79α-/HLA-DR-)를 발현하고, 골·연골·지방의 3계통 분화능을 가집니다.

얻은 세포는 시험관 내(in vitro) 실험, 약물 스크리닝과 안전성 평가, 질환 동물 모델에서의 세포 이식 연구에 쓸 수 있습니다(공식 제품 페이지). 설명서는 용도를 시험관 내 연구, 약물 스크리닝, 안전성 평가, 질환 관련 실험 모델 구축으로 적고 있습니다.

주요 용도

  • hPSC 유래 MSC 제작과 시험관 내 연구
  • 약물 스크리닝 · 안전성 평가
  • 질환 동물 모델의 세포 이식 연구 (공식 제품 페이지 표기)
  • MSC 유래 연구 재료 확보 (예: 질환 관련 실험 모델 구축, 설명서)

특징

  • hPSC에서 MSC로의 효율적인 분화용 (공식 Features)
  • 키트 1개로 P0 단계 MSC 약 2 × 10⁷개를 얻을 수 있습니다 (설명서 표기, 6-well plate 기준 절차)
  • Day 0부터 약 Day 13–14까지 단계별 완전 배지 A → B → C → D → E로 분화하며, Day 13–14에 세포가 가득 차면 P0 MSC로 봅니다 (설명서)
  • 분화된 세포의 표면 표지자: CD73+/CD90+/CD105+, CD14-/CD34-/CD45-/CD79α-/HLA-DR- (제조사 시험, 연속 배양 P5 세포의 유세포 분석)
  • 골·연골·지방 3계통 분화능, 정상 핵형, 안정적 증식 (제조사 표기)

구성 · 사양

구성
구성품 (영문 표기)Cat. No.용량수량보관
MSC Differentiation Supplement A (10×)RP01013-A0.5 mL1-80 °C 또는 -20 °C
MSC Differentiation Supplement B (10×)RP01013-B0.5 mL1-80 °C 또는 -20 °C
MSC Differentiation Supplement C (10×)RP01013-C1 mL1-80 °C 또는 -20 °C
MSC Differentiation Supplement D (10×)RP01013-D0.5 mL1-80 °C 또는 -20 °C
MSC Differentiation Supplement E (30×)RP01013-E1 mL1-80 °C 또는 -20 °C
MSC Differentiation Basal Medium FRP01013-F55 mL12–8 °C

보충제 A–E는 각각 기저 배지 F와 섞어 완전 배지 A–E(1×)로 씁니다. 키트 1개로 P0 MSC 약 2 × 10⁷개 (설명서).

분화 대상hPSC(인간 배아줄기세포·유도만능줄기세포) → MSC
분화 기간약 13–14일 (P0 MSC까지, 설명서)
예상 수율키트당 P0 MSC 약 2 × 10⁷개 (설명서)
표준 용기6-well plate, 2 mL/well (설명서)
분화 기질Day 10까지 Matrigel, Day 10 계대 이후 기질 없음 (공정 모식도)

사용 방법

함께 준비할 것

완전 배지 만들기

  1. 보충제 A–E를 4 °C에서 녹입니다(37 °C 금지).
  2. 생물안전작업대에서 기저 배지 F에 보충제를 1×가 되도록 섞어 완전 배지 A, B, C, D, E를 각각 만듭니다(A–D는 10×, E는 30× 원액).
  3. 바로 쓰거나 4 °C에서 2주 안에 씁니다.

hPSC 준비 (Day -2 ~ Day -1)

  1. hPSC는 해동 후 5계대 이상 지난 세포를 씁니다.
  2. 6-well plate에 4 × 10⁵ cells/well로 접종해 2일 배양합니다. 다른 용기는 4 × 10⁴ cells/cm², 배지 200 µL/cm².
  3. Day -1에 같은 방식으로 새 6-well plate에 접종합니다.

분화 유도 (Day 0 ~ Day 8)

  1. Day 0 (접종 24–36시간 후): hPSC 배지(NcEpic 또는 NcTarget)를 빼고 DMEM/F12로 2회 세척한 뒤 완전 배지 A 2 mL/well.
  2. Day 2 (배지 A 교체 40시간 후): DMEM/F12로 1회 세척 후 완전 배지 B 2 mL/well.
  3. Day 3 (24시간 후): 완전 배지 C 2 mL/well (세척 불필요). Day 4에 배지 C를 한 번 더 교체합니다.
  4. Day 6: 완전 배지 D 2 mL/well, Day 8: 완전 배지 E 2 mL/well (세척 불필요).
  5. Day -1 ~ Day 3의 배지 교체 시각은 엄격히 지켜야 합니다(설명서 권장 예: 오전 11시 계대 → 30시간 뒤 배지 A).

계대와 P0 수확 (Day 10 ~ Day 14)

  1. Day 10: DPBS 2 mL/well로 1회 세척 → Solase 2 mL, 37 °C·5% CO₂에서 3–5분 → 200 × g 5분 원심 → 완전 배지 E로 재부유해 1:4로 계대하고 배지 E로 계속 배양합니다(공정 모식도상 이후 기질 없음).
  2. Day 11: 완전 배지 E 2 mL/well로 교체.
  3. Day 13–14: 세포가 가득 차면 P0 hPSC 유래 MSC입니다. P0는 동결할 수 있습니다.
  4. P1은 5,000 cells/cm²로 계대하고, P2 세포부터 연구에 씁니다.

동결 보존

  1. DPBS 2 mL/well로 헹군 뒤 Solase 2 mL, 37 °C 3–5분 → 15 mL 튜브에 모아 200 × g 5분 원심.
  2. 무혈청 hMSC 배지 1 mL/well로 재부유해 세포 수를 셉니다.
  3. hMSC Cryopreservation Medium에 2 × 10⁶ cells/mL로 재부유해 액체질소에 보관합니다.
  4. 자세한 절차는 제품 설명서를 따릅니다.
분화 일정 (설명서 절차 · 공식 공정 모식도 기준, 6-well plate)
Day-2-1023–468101113–14
작업hPSC 접종 (4 × 10⁵ cells/well)새 plate에 재접종DMEM/F12 2회 세척 → 배지 ADMEM/F12 1회 세척 → 배지 B배지 C (Day 4 교체)배지 D배지 ESolase 해리 → 1:4 계대배지 E 교체가득 차면 P0 MSC
배지NcEpic™ / NcTarget™NcEpic™ / NcTarget™완전 배지 A완전 배지 B완전 배지 C완전 배지 D완전 배지 E완전 배지 E완전 배지 E완전 배지 E
기질MatrigelMatrigelMatrigelMatrigelMatrigelMatrigelMatrigel기질 없음기질 없음기질 없음

배지 부피 2 mL/well. 모식도에서 Day 10은 미성숙 iMSC(Immature iMSC), Day 14는 iMSC P0로 표시됩니다.

제품 설명서의 절차를 한국어로 요약했습니다. 실제 작업은 제품 설명서 원문과 소속 기관의 절차를 따르세요.

제조사 시험 자료

분화 공정 모식도
분화 공정 모식도Day -2에 hPSC를 NcEpic™/NcTarget™ hPSC Medium으로 준비하고, Day 0–2 배지 A, Day 2–3 배지 B, Day 3–6 배지 C, Day 6–8 배지 D, Day 8 이후 배지 E로 분화합니다. Day 10까지 Matrigel 위에서 배양해 미성숙 iMSC를 얻고, 이후 기질 없이 배양해 Day 14에 iMSC P0를 얻습니다.시험 조건: 기질: Day 10까지 Matrigel, 이후 기질 없음
영문 원문 설명

Process

출처: 공식 제품 페이지
분화 중 세포 형태와 연속 배양
분화 중 세포 형태와 연속 배양A, B, C: hPSC-MSC Differentiation Kit로 분화하는 동안의 세포 형태(그림 표기 Day 1, Day 8, Day 14). D, E, F: hPSC-MSC를 연속 배양했을 때 P1, P3, P6 세포의 계대 후 Day 3 형태. Scale bar: 200 µm.시험 조건: 위상차 현미경 사진. 사용 세포주·배양 용기 정보는 공개되지 않음. 패널 A의 날짜는 그림 표기(Day 1)와 웹 설명(Day 3)이 다름
영문 원문 설명

A, B, C: cell morphology on days 3, 8 and 14 during the differentiation process of hPSC-MSC Differentiation Kit. D, E, F: continuous culture of hPSC-MSC, showing the Day 3 morphology of P1, P3, and P6 generation cells respectively. Scale bar: 200 μm.

출처: 공식 제품 페이지
hPSC-MSC 표면 표지자 (유세포 분석)
hPSC-MSC 표면 표지자 (유세포 분석)연속 배양한 hPSC-MSC(P5)의 표면 표지자 분석입니다. 그림 수치: CD73 99.6%, CD90 98.9%, CD105 99.2% 양성, HLA-DR 0.07%, CD14 0.02%, CD34 0.01%, CD45 0.05%, CD79α 0.10%. 옅은 회색 선은 동종항체 음성 대조, 검은 선은 MSC 표면 표지자 발현입니다.시험 조건: hPSC-MSC P5, 유세포 분석(x축 형광 세기 로그, y축 세포 수). 제조사 시험 결과
영문 원문 설명

Surface marker detection of continuously cultured hPSC-MSC (P5): CD73+/CD90+/CD105+, CD14-/CD34-/CD45-/CD79α-/HLA-DR- (The picture above shows the results of flow cytometry analysis, the light gray line is the alloantibody negative control, and the black line is the expression of MSC cell surface markers)

출처: 공식 제품 페이지

제조사가 공개한 시험 결과입니다. 표시한 시료 · 조건에서 얻은 값이며, 사용하시는 세포 · 공정에서 같은 결과를 보장하지 않습니다.

보관 · 취급

  • 보충제(Supplement) A–E: -80 °C 또는 -20 °C
  • 기저 배지(Basal Medium) F: 2–8 °C
  • 만든 완전 배지는 2–8 °C(4 °C)에서 최대 2주 (설명서)
  • 보충제는 4 °C에서 녹이고 37 °C에서 녹이지 않습니다. 필요하면 나눠 얼리고, 동결·해동은 2회를 넘기지 않습니다 (설명서)

자료 · 영상

COA(시험성적서)는 제품 라벨의 REF(품목코드) · LOT(로트)로 Shownin 공식 COA 조회에서 찾거나 비투바이오에 요청해 주세요. 모든 Shownin 자료는 Shownin 자료실에 있습니다.

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