hPSC 전기천공(Nucleofection) 버퍼
hPSC Nucleofection Buffer · Cat. No. RP01005
미분화 상태의 인간 다능성 줄기세포(hiPSC · hESC) 전기천공용 버퍼입니다. 1회 반응에 세포 2–4 × 10⁶개 + 플라스미드 1–5 µg + 버퍼 100 µL(설명서).
| 선택 | Cat. No. | 판매 단위 | 수량 |
|---|---|---|---|
| 2.5 mL |
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개요
hPSC Nucleofection Buffer는 여러 배양 체계에서 미분화 상태로 키운 인간 다능성 줄기세포(hiPSC · hESC)의 전기천공(electroporation)을 위해 개발한 용액입니다.
제조사는 전기천공 효율이 안정적으로 높고, 전기천공 후 세포 생존율이 높으며, 배양 세포에 독성이 없어 이후 실험에 영향을 주지 않는다고 설명합니다.
2.5 mL 1병은 1회 반응에 100 µL를 쓰는 기준으로 25회 반응 분량입니다(설명서 표 1: 2.5 mL / 25 rxn). 전기천공 전에는 세포를 반드시 단일세포로 해리해야 하며, 세포 덩어리가 남으면 효율과 생존율이 떨어집니다(설명서).
주요 용도
- hiPSC · hESC에 플라스미드 DNA를 전기천공으로 도입하는 연구
- 리포터 유전자(예: EGFP) 발현 세포주 제작 연구
- 전기천공 후 16–24시간 시점의 유전자 발현 확인 (설명서)
특징
- 높은 전기천공 효율 (공식 Features)
- 전기천공 후 높은 세포 생존율 (공식 Features)
- 제조사 시험: EGFP 발현 플라스미드 pPBmPNEE(약 6.5 kb) 2 µg을 hiPSC에 전기천공하고 24시간 뒤 유세포 분석한 결과 EGFP 양성 세포 85.43% (공식 그림 A)
- 1회 반응 조성: hPSC 2–4 × 10⁶개 + 플라스미드 DNA 1–5 µg + 버퍼 100 µL (설명서 표 3)
- 여러 배양 체계(NcEpic™ · NcTarget™ 등)에서 미분화 상태로 키운 hPSC에 사용 (공식 Overview · 설명서)
구성 · 사양
| 구성품 (영문 표기) | Cat. No. | 용량 | 수량 | 보관 |
|---|---|---|---|---|
| hPSC Nucleofection Buffer | RP01005 | 2.5 mL | 1 | 2–8 °C |
| 형태 | 바로 쓰는 전기천공 버퍼 (2.5 mL) |
|---|---|
| 반응 횟수 | 2.5 mL = 25회 반응(1회 100 µL) (설명서) |
| 1회 반응 세포 수 | hPSC 2–4 × 10⁶개 (설명서) |
| 1회 반응 플라스미드 | 1–5 µg (전체 부피 10 µL 이하, 농도 0.5–1 µg/µL, A260/A280 약 1.80) (설명서) |
| 권장 전기천공 조건 | Amaxa Nucleofector(II · IIb 등), 프로그램 B016 (설명서) |
| 발현 확인 시점 | 전기천공 16–24시간 후 (설명서) |
사용 방법
함께 준비할 것
- 전기천공 장비 (Amaxa Nucleofector II · IIb 등) 및 호환 큐벳 · 플라스틱 드로퍼 — 설명서가 지정한 장비와 프로그램 B016이 필요합니다 (설명서 표 2 · 전기천공 절차)
- Solase — 전기천공 전 단일세포 해리, 6-well 1 mL/well, 37 °C 5–10분 (설명서)
- NcEpic™ hPSC Medium — 전기천공 전후 hPSC 배양 (설명서)
- NcTarget™ hPSC Medium — NcEpic™ 대신 쓸 수 있는 hPSC 배지 (설명서)
- Matrigel 또는 Vitronectin 코팅 배양 용기 — 전기천공 후 세포를 받을 배양 기질 (설명서)
- ROCK 억제제 — 전기천공 후 세포를 받을 배지에 첨가 (설명서 '배양 배지 + ROCK inhibitor')
- 플라스미드 DNA (0.5–1 µg/µL, A260/A280 약 1.80) — 사용자가 준비 (설명서)
- DPBS, DMEM/F12 — 세척 · 해리 정지 · 재부유용 일반 시약 (설명서)
전기천공 전 hPSC 준비
- hPSC는 1:10–1:20으로 4일마다 계대하고 매일 배지를 갈아 줍니다. 세포가 80–90% 찼을 때 전기천공을 권장합니다.
- Matrigel 같은 feeder-free 체계의 hPSC는 실온으로 데운 Solase로 37 °C에서 5–10분 해리합니다.
- 데운 DMEM/F12를 넣어 해리를 멈추고, 5 mL 피펫으로 1–2회 피펫팅해 단일세포 현탁액을 만듭니다.
- feeder 체계에서 키운 세포는 전기천공 전에 Matrigel로 한 번 계대해 80–90%까지 키운 뒤 같은 방법으로 해리합니다.
전기천공 (6-well plate 1 well 기준)
- 전기천공 장비를 준비하고 프로그램 B016으로 설정합니다. Solase(6-well 1 mL/well)와 DMEM/F12(3 mL/well)를 실온으로 데웁니다.
- Matrigel 코팅 plate 각 well에 배양 배지 + ROCK 억제제 2 mL를 넣고 37 °C에서 미리 평형시킵니다.
- 1.5 mL 튜브에 플라스미드 DNA 1–5 µg(총 10 µL 이하)을 넣고, 버퍼 100 µL를 더해 섞은 뒤 짧게 원심해 모읍니다.
- 세포는 DPBS 2 mL/well로 헹군 뒤 Solase 1 mL/well, 37 °C 5–10분으로 해리하고, DMEM/F12 2 mL/well을 넣어 1–2회 피펫팅합니다.
- 15 mL 튜브에 모아 120 × g에서 4분 원심하고, DMEM/F12 약 1 mL/well로 재부유해 계수한 뒤 튜브당 2–4 × 10⁶개로 나눕니다.
- 8초간 짧게 원심해 세포를 모으고 상층액을 제거한 뒤, 준비한 버퍼 · 플라스미드 혼합액을 넣고 튜브 바닥을 가볍게 두드려 섞습니다(피펫팅 금지).
- 전기천공 큐벳으로 옮기고 거품을 뺀 뒤 B016 프로그램을 실행합니다. 이 단계부터는 빠르고 부드럽게 진행합니다.
- 평형시킨 plate에서 배지 약 500 µL를 큐벳 벽을 따라 넣어 섞고, 해당 well로 조심해서 옮깁니다. 37 °C 배양기에 두고 16–24시간 뒤 유전자 발현을 확인합니다. 자세한 절차는 제품 설명서를 따릅니다.
| 항목 | 양 |
|---|---|
| hPSC | 2 × 10⁶ – 4 × 10⁶ cells |
| 플라스미드 DNA | 1–5 µg (총 부피 10 µL 이하) |
| hPSC Nucleofection Buffer | 100 µL |
플라스미드 농도 0.5–1 µg/µL, A260/A280 약 1.80 권장 (설명서 표 2)
제품 설명서의 절차를 한국어로 요약했습니다. 실제 작업은 제품 설명서 원문과 소속 기관의 절차를 따르세요.
제조사 시험 자료
영문 원문 설명
A: 2 μg of pPBmPNEE plasmid (~6.5 kb) expressing EGFP was electroporated into hiPSCs, and flow cytometry was used to assess EGFP-positive cells 24 hours after transfection. The transfection efficiency was as high as 85.43%. B, C: Day 3 hiPSC-Luc-GFP (P32) cells. Scale bar: 200 μm.
제조사가 공개한 시험 결과입니다. 표시한 시료 · 조건에서 얻은 값이며, 사용하시는 세포 · 공정에서 같은 결과를 보장하지 않습니다.
보관 · 취급
- 보관 2–8 °C (공식 제품 페이지). 설명서 보관 조건은 4 °C
- 유효기간 6개월 (설명서)
- 사용 전 버퍼를 실온으로 맞춥니다 (설명서 권장 재료 표)
자료 · 영상
- PDFhPSC Nucleofection Buffer — Product Manual
hPSC 전기천공(Nucleofection) 버퍼 제품 설명서(영문): 제품 정보 · 구성 · 보관 · 사용 절차.
제품 설명서 · 영문 · PDF · 4쪽 · 195 KB · PDF 작성 2026-01-16 · 공식 원문
COA(시험성적서)는 제품 라벨의 REF(품목코드) · LOT(로트)로 Shownin 공식 COA 조회에서 찾거나 비투바이오에 요청해 주세요. 모든 Shownin 자료는 Shownin 자료실에 있습니다.
인용 논문
- Base editing-mediated splicing correction therapy for spinal muscular atrophyXiang Lin, et al. Cell Research, 2020
제조사가 공식 사이트에 공개한 사용 논문 목록입니다.
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