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NcMission™ hMSC Medium V3.0 (인간 중간엽줄기세포 무혈청 배양 배지)

NcMission™ hMSC Medium V3.0 · Cat. No. RP02010

인간 중간엽줄기세포(hMSC)를 조직에서 처음 분리할 때부터 계대 배양까지 쓰는 무혈청 배지입니다. 기저 배지 500 mL와 보충제 25 mL로 구성됩니다.

NcMission™ hMSC Medium V3.0 제품 사진
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Shownin · hMSC · 배양 배지
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500 mL
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Shownin 공식 제품 페이지 ↗

개요

NcMission™ hMSC Medium V3.0은 인간 중간엽줄기세포(hMSC, human mesenchymal stem cell) 배양용으로 만든 배지입니다. 기저 배지(Basal Medium)와 보충제(Supplement)를 섞어 완전 배지로 사용합니다.

제조사 설명서에 따르면 무혈청(serum-free)·동물 유래 성분 무첨가(animal component-free) 완전 배지이며, 이 배지로 배양한 hMSC는 안정적으로 증식하고 정상적인 표면 마커 발현(CD73+/CD90+/CD105+, CD14-/CD34-/CD45-/CD79α-/HLA-DR-)과 골·연골·지방 3계통 분화능을 유지합니다.

공식 페이지는 여러 조직에서 얻은 MSC 배양과, 1차 분리부터 계대 배양까지 전 과정에 쓸 수 있다고 안내합니다. 브로셔는 적용 조직으로 지방(Adipose), 탯줄(Umbilical Cord), 골수(Bone Marrow)를 제시합니다.

주요 용도

  • 지방·탯줄(와튼 젤리)·골수 등 조직에서 hMSC 1차 분리 및 배양
  • hMSC 계대 배양과 증식
  • iPSC 유래 MSC 배양 (브로셔)
  • hMSC 유래 세포외소포(EV) 연구 (공식 페이지 인용 논문)
  • 분화 시험 전 hMSC 준비 배지 (Shownin 분화 키트 설명서 권장)

특징

  • 여러 조직 유래 MSC 배양에 사용 (공식 제품 페이지)
  • 1차 분리(primary isolation)부터 계대 배양(subculture)까지 같은 배지로 진행 (공식 제품 페이지)
  • 세포 수확량: T175 플라스크 1개에서 2.0 × 10⁷ cells, 10단 세포 공장(10-layer cell factory)에서 8.0 × 10⁸ cells 수확 (제조사 표기, 접종 밀도·배양 기간 미기재)
  • 탯줄 1개에서 P4까지 1조(10¹²) 개 이상의 세포를 얻을 수 있다고 표기 (제조사 표기, 세부 시험 조건 미기재)
  • 2D 배양과 3D 배양 모두에 사용, iPSC 유래 MSC(iPSC-MSC)에도 사용 (브로셔)
  • 3일 간격 계대 배양 (브로셔; 설명서 기준 6000–8000 cells/cm² 접종 후 3일 배양, 80–85% 컨플루언스에서 계대)
  • 연속 계대 시험: T25, 6000 cells/cm² 접종, 3일 간격으로 P1–P10까지 계대했을 때 누적 집단 배가 수준(CPDL) 37.60 (P10) (공식 제품 페이지 그림, 제조사 시험 결과)
  • P5 세포의 유세포 분석: CD73 99.7%, CD90 99.1%, CD105 99.8% 양성, HLA-DR 0.18%, CD14 0.11%, CD34 0.21%, CD45 0.15%, CD79α 0.013% (공식 제품 페이지 그림, 제조사 시험 결과)
  • 배양 상등액의 세포외소포(EV) 1 × 10¹⁰/mL, HGF 20,000–50,000 pg/mL 수준 (브로셔, NcMission 배지 3일 배양 기준, 세포 종류·밀도 미기재)

구성 · 사양

구성
구성품 (영문 표기)Cat. No.용량수량보관
NcMission™ hMSC Medium V3.0 Basal MediumRP02010-01500 mL12–8 °C
NcMission™ hMSC Medium V3.0 SupplementRP02010-0225 mL1-80 °C 또는 -20 °C

기저 배지와 보충제를 섞어 완전 배지로 사용합니다. 설명서에는 보충제가 21× 농축으로 표기되어 있습니다.

형태기저 배지 + 보충제(21×) 2종 구성, 혼합해 완전 배지 525 mL 조제 (설명서)
주요 성분 특성무혈청 · 동물 유래 성분 무첨가 (설명서 표기)
대상 세포인간 중간엽줄기세포(hMSC), 지방·탯줄·골수 등 여러 조직 유래
권장 접종 밀도6000–8000 cells/cm² (설명서)
배양 조건37 °C, 5% CO₂, 포화 습도 (설명서)

사용 방법

함께 준비할 것

  • hMSC Cryopreservation Medium — 세포 동결 시 (설명서 권장 시약)
  • TrypLE Express Enzyme (1×), no phenol red — 세포 해리용 (설명서 권장 시약)
  • DPBS (Ca²⁺/Mg²⁺ 없음), 생리식염수 — 세척·세포 계수용 (설명서)
  • 0.1% Type II collagenase, 70 μm·100 μm 세포 여과기 — 지방 조직 1차 분리 시 (설명서)
  • T75/T175/T225 배양 플라스크, 15·50 mL 원심분리 튜브, 1.5·2 mL 동결 바이알 — 설명서 권장 소모품

완전 배지 만들기

  1. Supplement를 4 °C에서 녹입니다(37 °C에서 녹이지 않음).
  2. 생물안전작업대에서 Basal Medium 500 mL와 Supplement 25 mL를 멸균 피펫으로 섞습니다.
  3. 완전 배지는 2–8 °C에 두고 2주 안에 씁니다.
  4. 필요하면 Supplement를 5 mL씩 5개로 나눠 얼린 뒤, 5 mL를 Basal Medium 100 mL와 섞어 씁니다(냉동·해동 2회 이내).

지방 조직에서 hMSC 1차 분리 (설명서 예시)

  1. 지방 조직은 4 °C로 운반해 24시간 안에 처리합니다.
  2. DPBS(또는 생리식염수)로 혈액색이 없어질 때까지 씻고 약 1–2 mm³ 크기로 자릅니다.
  3. 0.1% Type II collagenase로 37 °C에서 흔들며 45–60분 소화한 뒤 800 × g 10분 원심분리합니다. 아래층을 70 μm 세포 여과기로 거르고 600 × g 8분 원심분리, 세척(600 × g 5분)을 2회 합니다.
  4. 완전 배지로 2 × 10⁴ cells/mL로 맞춰 T25 플라스크에 접종하고 37 °C, 5% CO₂에서 배양합니다.
  5. 48시간 뒤 배지를 갈고 이후 3일마다 갈아 줍니다. 90% 컨플루언스에서 세포를 거둡니다.

계대 배양 (T75 기준)

  1. 세포가 약 80–85% 컨플루언스일 때 계대합니다. 완전 배지와 해리 용액은 30분 전에 꺼내 실온에 맞춥니다.
  2. 배지를 빼고 DPBS(Ca²⁺/Mg²⁺ 없음)로 씻은 뒤 37 °C로 데운 TrypLE(표 참고)를 넣고 37 °C에서 5–7분 둡니다(중간에 움직이지 않음).
  3. 같은 부피의 완전 배지로 중화하고 200 × g 5분 원심분리합니다.
  4. 생리식염수 5 mL에 풀어 100 μm 여과기로 거른 뒤 세포를 셉니다(생존율 ≥90% 권장). 다시 200 × g 5분 원심분리합니다.
  5. 완전 배지 5 mL에 풀어 6000–8000 cells/cm²로 접종하고 표의 부피만큼 완전 배지를 더합니다. 가로로 3번 흔들어 37 °C, 5% CO₂에서 3일 배양합니다.

해동과 동결

  1. 해동: 37 °C 수조에서 작은 얼음 조각만 남을 때까지 녹이고, 15 mL 튜브로 옮겨 실온 완전 배지 10 mL를 한 방울씩 넣은 뒤 200 × g 5분 원심분리합니다. 완전 배지 5 mL에 풀어 세고 6000–8000 cells/cm²로 접종합니다.
  2. 동결: 원심분리 후 동결 배지로 일정 밀도(예: 바이알당 2 × 10⁶ cells)로 풀어 프로그램 냉각 용기에 넣고 -80 °C에서 하룻밤 둔 뒤 다음 날 액체질소로 옮깁니다.

다른 배지에서 옮겨 올 때

  1. 원래 배지로 세포를 회복 또는 계대한 뒤, 1일째에 NcMission™ hMSC Medium V3.0으로 배지를 바꿉니다. 1회 계대 후 새 배지에 적응합니다.
  2. 자세한 절차는 제품 설명서를 따릅니다.
용기별 권장 사용량 (설명서 표 3)
용기배양 면적완전 배지TrypLE
6-well plate9.6 cm²/well2 mL/well1 mL/well
T7575 cm²15 mL4 mL
T175175 cm²25 mL8 mL
T225225 cm²35 mL10 mL

제품 설명서의 절차를 한국어로 요약했습니다. 실제 작업은 제품 설명서 원문과 소속 기관의 절차를 따르세요.

제조사 시험 자료

연속 계대 배양 시 세포 형태와 증식 (P1–P10)
연속 계대 배양 시 세포 형태와 증식 (P1–P10)NcMission™ hMSC Medium에서 계속 배양한 hMSC를 T25 플라스크에 6000 cells/cm², 배지 0.2 mL/cm²로 접종해 3일간 배양했습니다. G, H, I: 배양 1일, 2일, 3일째 세포 형태. J: P1부터 P10까지 연속 계대한 세포의 누적 집단 배가 수준(CPDL) — P1 4.06, P5 19.70, P10 37.60. K: P1–P10 집단 배가 시간(PDT) — P1 17.73에서 P10 21.99 (세로축 단위는 그림에 표시되지 않음). F(오른쪽 아래): P8, 3일째 hMSC. Scale bar: 200 μm.시험 조건: T25 플라스크, 6000 cells/cm² 접종, 배지 0.2 mL/cm², 3일 간격 계대, P1–P10. 세포 유래 조직은 그림 설명에 없음 (제조사 시험 결과)
영문 원문 설명

hMSC cells continuously cultured in NcMission™ hMSC Medium were seeded at a density of 6000 / cm2 with culture medium 0.2 mL/cm2 in T25 for 3 days. G, H, and I: Cell morphology on day 1, 2, and 3, respectively. J: Cumulative population doubling of cells continuously passaged from P1 to P10; K: Population doubling time of cells continuously passaged from P1 to P10; F: P8D3 hMSC. Scale bar: 200 μm.

출처: 공식 제품 페이지
배양한 hMSC의 표면 마커 (P5, 유세포 분석)
배양한 hMSC의 표면 마커 (P5, 유세포 분석)NcMission™ hMSC Medium으로 계속 배양한 hMSC(P5)의 유세포 분석 결과입니다. 연회색 선은 동형 대조군(isotype control), 검은 선은 MSC 표면 마커입니다. 양성 마커 CD73 99.7%, CD90 99.1%, CD105 99.8%; 음성 마커 HLA-DR 0.18%, CD14 0.11%, CD34 0.21%, CD45 0.15%, CD79α 0.013% (그림 수치).시험 조건: P5 hMSC, 유세포 분석(가로축 FL1-A FITC 또는 FL4-A APC 형광, 세로축 세포 수). 세포 유래 조직 미기재 (제조사 시험 결과)
영문 원문 설명

NcMission™ hMSC Medium continuous cultured hMSC cells (P5) (The picture above shows the results of flow cytometry analysis, the light gray line is the isotype control, and the black line is the MSC cell surface marker)

출처: 공식 제품 페이지

제조사가 공개한 시험 결과입니다. 표시한 시료 · 조건에서 얻은 값이며, 사용하시는 세포 · 공정에서 같은 결과를 보장하지 않습니다.

보관 · 취급

  • Basal Medium 2–8 °C, Supplement -80 °C 또는 -20 °C (공식 제품 페이지)
  • 완전 배지는 2–8 °C에서 최대 2주 보관 (공식 제품 페이지·설명서)
  • Supplement는 4 °C에서 녹이고 37 °C에서 녹이지 않습니다. 냉동·해동은 2회를 넘기지 않습니다 (설명서)

자료 · 영상

사용법 영상 (Shownin 공식 YouTube)

MSC 계대Shownin MSC Product System Usage Protocols: Passaging YouTube에서 보기
MSC 해동Shownin MSC Product System Usage Protocols: Thawing YouTube에서 보기

COA(시험성적서)는 제품 라벨의 REF(품목코드) · LOT(로트)로 Shownin 공식 COA 조회에서 찾거나 비투바이오에 요청해 주세요. 모든 Shownin 자료는 Shownin 자료실에 있습니다.

인용 논문

  1. Reversing the surface charge of MSC-derived small extracellular vesicles by εPL-PEG-DSPE for enhanced osteoarthritis treatmentKai Feng, et al. Journal of Extracellular Vesicles, 2021
  2. A bone-targeted engineered exosome platform delivering siRNA to treat osteoporosisYongzhi Cui, et al. Bioactive Materials, 2021
  3. Large extracellular vesicles secreted by human iPSC-derived MSCs ameliorate tendinopathy via regulating macrophage heterogeneityTeng Ye, et al. Bioactive Materials, 2022
  4. Dual-bionic regenerative microenvironment for peripheral nerve repairYanjun Guan, et al. Bioactive Materials, 2023
  5. Small extracellular vesicles secreted by human iPSC-derived MSC enhance angiogenesis through inhibiting STAT3dependent autophagy in ischemic strokeYuguo Xia, et al. Stem Cell Research & Therapy, 2020
  6. Systemic proteomics and miRNA profile analysis of exosomes derived from human pluripotent stem cellsYoukun Bi, et al. Stem Cell Research & Therapy, 2022

제조사가 공식 사이트에 공개한 사용 논문 목록입니다.

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