hPSC-mDAP 분화 키트 (중뇌 도파민 신경 전구세포·신경세포)
hPSC-mDAP Differentiation Kit · Cat. No. RP01017
hPSC를 11일 동안 중뇌 도파민 신경 전구세포(mDAP)로 분화시키는 키트입니다. 별도 유지·성숙 배지와 함께 쓰면 성숙 도파민 신경세포(mDAN)까지 얻습니다.
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개요
hPSC-mDAP Differentiation Kit(RP01017)는 인간 다능성 줄기세포(hPSC)를 중뇌 도파민 신경 전구세포(midbrain dopaminergic progenitor, mDAP)로 분화시키고, 이어서 성숙한 중뇌 도파민 신경세포(midbrain dopaminergic neuron, mDAN)로 키우기 위한 제품군입니다. 공식 페이지는 hPSC-mDAP Differentiation Kit, hPSC-mDAP Maintenance Medium(RP01017-H), hPSC-mDAN Maturation Medium(RP01017-I)을 연구 목적에 맞게 골라 조합할 수 있다고 설명합니다.
제조사에 따르면 hPSC-mDAP Differentiation Kit로 Lmx1a+/Foxa2+/En1+ 발현 90% 이상의 mDAP를 얻을 수 있고, hPSC-mDAN Maturation Medium은 mDAP를 TH+/Nurr1+ 성숙 mDAN으로 분화시킵니다. 성숙 mDAN은 전기생리 활성과 도파민 분비 기능을 보입니다(제조사 시험).
얻은 mDAP와 mDAN은 신경퇴행성 질환 연구, 약물 스크리닝, 파킨슨병 모델의 세포 이식 연구에 쓸 수 있습니다(공식 제품 페이지).
주요 용도
- 신경퇴행성 질환(파킨슨병 등) 연구
- 약물 스크리닝
- 파킨슨병 동물 모델의 세포 이식 연구 (공식 제품 페이지 표기)
- 도파민 신경세포 기능 분석(도파민 분비, 전기생리)
특징
- hPSC에서 도파민 신경세포로의 효율적 분화용 (공식 Features)
- Day 11에 Lmx1a+/Foxa2+/En1+ 90% 이상의 mDAP (제조사 표기; 공식 그림의 유세포 분석 Foxa2+/En1+ 94.29%, Foxa2+/Lmx1a+ 93.79%)
- 키트 1개로 Day 11 mDAP 1 × 10⁷개 이상, 6-well plate 4 well 또는 12-well plate 8 well 분량 (설명서)
- mDAP 동결 보존 배지(Cryopreservation Medium G) 포함 — 전구세포 단계에서 동결해 두었다가 해동 후 유지·성숙 배양 가능 (설명서)
- hPSC-mDAN Maturation Medium으로 성숙시킨 mDAN: TH+/Nurr1+, 도파민 분비 2000 pg/mL 초과, 패치 클램프 전기생리 활성 (제조사 시험, 공식 그림)
구성 · 사양
| 구성품 (영문 표기) | Cat. No. | 용량 | 수량 | 보관 |
|---|---|---|---|---|
| mDAP Differentiation Supplement A (100×) | RP01017-A | 100 µL | 1 | -20 °C 또는 -80 °C |
| mDAP Differentiation Supplement B (100×) | RP01017-B | 200 µL | 1 | -20 °C 또는 -80 °C |
| mDAP Differentiation Supplement C (100×) | RP01017-C | 200 µL | 1 | -20 °C 또는 -80 °C |
| mDAP Differentiation Supplement D (100×) | RP01017-D | 200 µL | 1 | -20 °C 또는 -80 °C |
| mDAP Differentiation Supplement E (100×) | RP01017-E | 600 µL | 1 | -20 °C 또는 -80 °C |
| mDAP Differentiation Basal Medium F | RP01017-F | 120 mL | 1 | 2–8 °C |
| mDAP Cryopreservation Medium G | RP01017-G | 50 mL | 1 | 2–8 °C |
위 구성은 설명서 표 3 기준입니다(공식 페이지 표에는 세부 구성이 없음). 공식 페이지는 함께 쓰는 hPSC-mDAP Maintenance Medium(RP01017-H, 100 mL: Basal 99 mL + Supplement 100× 1 mL)과 hPSC-mDAN Maturation Medium(RP01017-I, 50 mL: Basal 50 mL + Supplement 100× 0.5 mL)을 별도 품목으로 표시합니다.
| 분화 대상 | hPSC → mDAP(Day 11) → mDAN(성숙 배지 사용 시) |
|---|---|
| 예상 수율 | 키트당 Day 11 mDAP 1 × 10⁷개 이상 (설명서) |
| 사용 분량 | 6-well plate 4 well 또는 12-well plate 8 well (설명서) |
| mDAP 순도 | Lmx1a+/Foxa2+/En1+ 90% 초과 (제조사 표기) |
| 분화 기질 | Day 15 무렵까지 Matrigel, 성숙 단계는 Laminin (공정 모식도) — 설명서는 PLO/Laminin 또는 ncLaminin511 코팅 |
사용 방법
함께 준비할 것
- NcEpic™ hPSC Medium 또는 NcTarget™ hPSC Medium — 분화 시작 전 hPSC 유지 배양용. 설명서는 Day 0에 hPSC 완전 배지(NcEpic 또는 NcTarget)를 제거하고 분화를 시작한다고 적고 있습니다.
- NcTarget™ hPSC Medium — NcEpic™ 대신 쓸 수 있는 hPSC 배지 (설명서 권장 시약)
- Corning® Matrigel® Matrix — 분화 단계 배양 기질(코팅). 키트에 없음 (설명서·공정 모식도)
- hPSC Dissociation Buffer — hPSC 계대용 (설명서 권장 시약)
- ROCK Inhibitor-Blebbistatin (10 mM) — 설명서 권장 시약
- DMEM/F12, DPBS(칼슘·마그네슘 없음) — 세척·희석용 일반 시약 (설명서)
- Solase — Day 0 hPSC 해리, Day 11 mDAP 수확, 유지 배양 후 회수 (설명서)
- Vitronectin — 설명서 권장 시약 (hPSC 배양 기질)
- ncLaminin511 — mDAP 유지·mDAN 성숙용 코팅 (PLO/Laminin 대신 사용 가능, 설명서)
- Poly-L-ornithine + Laminin — mDAN 성숙용 PLO/Laminin 코팅 (설명서)
- hPSC-mDAP Maintenance Medium (RP01017-H) · hPSC-mDAN Maturation Medium (RP01017-I) — mDAP 유지·mDAN 성숙 단계용. 공식 페이지에 별도 품목으로 표시
- Dopaminergic Neuron Electrophysiology Medium (RP01017-J) — 전기생리 기록 전 3일 배양용 (설명서에 언급, 공식 페이지에 없음)
- TrypLE — 성숙 신경세포 분석용 해리 (설명서)
- hPSC Cryopreservation Medium — hPSC 동결용 (설명서 권장 시약)
완전 배지 만들기
- 보충제 A–E와 기저 배지 F를 4 °C에서 녹입니다(37 °C 금지).
- 기저 배지 F에 보충제(100×)를 1×가 되도록 섞어 완전 배지 A–E를 만듭니다.
- 새로 만들어 쓰는 것을 권장하며, 4 °C에서 2주 안에 씁니다.
mDAP 분화 (Day 0 ~ Day 11)
- Day 0: hPSC가 약 85% 차면 DPBS로 1회 헹군 뒤 Solase 2 mL/well, 37 °C·5% CO₂에서 5–8분 해리 → 미니 원심분리 10–15초.
- hPSC 2 × 10⁶개를 미리 데운 완전 배지 A 8 mL에 넣고 Blebbistatin(10 mM) 8 µL(1:1000)를 섞어, Matrigel 코팅 6-well plate 4 well에 2 mL/well씩 접종합니다(5 × 10⁵ cells/well; 다른 용기는 5 × 10⁴ cells/cm²).
- Day 1–3 완전 배지 B, Day 3–5 배지 C, Day 5–7 배지 D, Day 7–11 배지 E — 모두 2 mL/well, 매일 교체.
- Day 11: DPBS로 헹군 뒤 Solase 1 mL/well, 37 °C에서 8–10분 → DPBS 1 mL/well로 모아 178 × g 5분 원심. 이 세포가 mDAP입니다.
mDAP 동결과 해동·유지
- 동결: mDAP Cryopreservation Medium G에 5 × 10⁶ cells/mL로 맞춰 1 mL/바이알 → 서서히 얼리는 용기에 넣어 -80 °C, 다음 날 액체질소로 옮깁니다.
- 해동: Matrigel 또는 ncLaminin511 코팅 6-well plate 준비. mDAP Maintenance Medium에 Blebbistatin 1:2000(최종 5 µM)을 넣습니다.
- 37 °C 수조에서 1분 안에 녹이고, DMEM/F12 10 mL를 한 방울씩 넣어 섞은 뒤 178 × g 5분 원심.
- 1 × 10⁵ cells/cm², 배지 0.2 mL/cm²로 접종 → 18–24시간 뒤 유지 배지 3 mL/well로 교체, 이후 2일마다 교체. 해동 4–5일째 Solase(5–8분)로 회수해 성숙 단계에 씁니다.
mDAN 성숙 배양
- 코팅(24-well plate): PLO — 차가운 멸균수 12 mL에 Poly-L-ornithine(10 mg/mL) 4.8 µL, 500 µL/well, 4 °C 하룻밤 → 다음 날 DPBS로 헹굼 → Laminin — 차가운 DPBS 12 mL에 Laminin(1 mg/mL) 48 µL, 500 µL/well, 4 °C. 또는 ncLaminin511(100 µg/mL) 240 µL를 DPBS 12 mL에 섞어 500 µL/well.
- 해동 후 4–5일 된 mDAP를 Blebbistatin(5 µM)이 든 mDAP Maintenance Medium으로 재부유해 5 × 10⁵ cells/cm²(설명서 표기)로 접종합니다.
- 18–24시간 뒤 hPSC-mDAN Maturation Medium 0.5 mL/well로 교체, 처음 7일은 매일, 이후 2일마다 교체합니다.
- 성숙 20–30일 후 성숙 표지자 분석, 40–50일 후 전기생리 분석이 가능합니다(전기생리 기록 전 Dopaminergic Neuron Electrophysiology Medium(RP01017-J)으로 3일 배양).
- 분석용 단일세포 해리는 TrypLE, 37 °C 10–15분(15분 초과 금지). 자세한 절차는 제품 설명서를 따릅니다.
| Day | -4 | 0 | 1–3 | 3–5 | 5–7 | 7–11 | 11–15 | 15–35/45 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 단계 | hPSC 준비 | 접종 | 분화 | 분화 | 분화 | 분화 → Day 11 mDAP | mDAP 유지 | mDAN 성숙 |
| 배지 | NcEpic™ / NcTarget™ | 완전 배지 A + Blebbistatin 1:1000 | 완전 배지 B | 완전 배지 C | 완전 배지 D | 완전 배지 E | mDAP Maintenance Medium (H) | mDAN Maturation Medium (I) |
| 기질 | Matrigel | Matrigel | Matrigel | Matrigel | Matrigel | Matrigel | Matrigel (설명서: Matrigel 또는 ncLaminin511) | Laminin (설명서: PLO/Laminin 또는 ncLaminin511) |
6-well plate 기준 분화 단계 배지 2 mL/well, 매일 교체. Day 11–15 유지 단계 기간은 모식도 기준이며, 설명서는 해동 후 4–5일 유지로 적고 있습니다.
제품 설명서의 절차를 한국어로 요약했습니다. 실제 작업은 제품 설명서 원문과 소속 기관의 절차를 따르세요.
제조사 시험 자료
영문 원문 설명
Process
영문 원문 설명
A, B, C: cell morphology on days 11, 12 and 45 during the differentiation process of hPSC-Dopaminergic Neuron Differentiation Kit. Scale bar: 200 μm. D, E, F: mDAP-specific marker detection (LMX1a, FOXA2, EN1, OTX2).
영문 원문 설명
G, H, I: Cell fluorescence illustration of mature midbrain dopaminergic neurons (mDAN, Day 40). Scale bar: 200 μm. J: Dopamine release level test results, dopamine release >2000 pg/mL. K, L: Patch-clamp test results of hPSC-derived mature midbrain dopaminergic neurons (mDAN, Day 42).
제조사가 공개한 시험 결과입니다. 표시한 시료 · 조건에서 얻은 값이며, 사용하시는 세포 · 공정에서 같은 결과를 보장하지 않습니다.
보관 · 취급
- 기저 배지(Basal Medium): 2–8 °C
- 보충제(Supplement): -80 °C ~ -20 °C
- 만든 완전 배지는 2–8 °C(4 °C)에서 최대 2주 (설명서)
- 보충제는 4 °C에서 녹이고 37 °C에서 녹이지 않습니다. 나눠 얼릴 수 있으며 동결·해동은 2회 이내 (설명서)
자료 · 영상
- PDFhPSC-mDAP Differentiation Kit — Product Manual
hPSC-mDAP 분화 키트 (중뇌 도파민 신경 전구세포·신경세포) 제품 설명서(영문): 제품 정보 · 구성 · 보관 · 사용 절차.
제품 설명서 · 영문 · PDF · 8쪽 · 628 KB · PDF 작성 2026-01-16 · 공식 원문
COA(시험성적서)는 제품 라벨의 REF(품목코드) · LOT(로트)로 Shownin 공식 COA 조회에서 찾거나 비투바이오에 요청해 주세요. 모든 Shownin 자료는 Shownin 자료실에 있습니다.
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