hPSC-망막색소상피(RPE) 분화 키트
hPSC-RPE Differentiation kit · Cat. No. RP01016
hPSC를 약 35–45일 동안 망막색소상피(RPE) 세포로 분화시키는 키트입니다. 분화 배지, 이질 세포 제거용 정제 버퍼, 동결 배지를 함께 담았습니다.
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개요
hPSC-RPE Differentiation Kit(RP01016)는 인간 다능성 줄기세포(hPSC)를 망막색소상피(retinal pigment epithelium, RPE) 세포로 분화시키는 키트입니다. RPE 분화 배지, RPE 정제 버퍼(RPE Purification Buffer), RPE 동결 보존 배지(RPE Cryopreservation Medium)로 구성됩니다.
분화는 RPE 전구세포(Day 6), 미성숙 RPE(Day 16), 성숙 RPE(Day 35–45)의 단계로 진행되며, Day 23에 정제 버퍼로 섬유아세포 모양의 이질 세포를 떼어 내 RPE만 남깁니다(설명서·공정 모식도).
제조사에 따르면 이 키트로 MiTF+/ZO-1+ 95% 이상의 RPE를 얻을 수 있으며, 얻은 세포는 시험관 내 실험, 약물 스크리닝과 안전성 평가, 질환 동물 모델의 세포 이식 실험에 쓸 수 있습니다(공식 제품 페이지).
주요 용도
- 망막색소상피 세포 연구용 모델
- 약물 스크리닝 · 안전성 평가
- 질환 동물 모델의 세포 이식 실험 (공식 제품 페이지 표기)
특징
- hPSC에서 RPE로의 효율적 분화용 (공식 Features)
- MiTF+/ZO-1+ 95% 초과 RPE (제조사 표기)
- 키트 1개로 성숙 RPE 약 1 × 10⁷개, 12-well plate 6 well 또는 6-well plate 3 well 분량 (설명서)
- RPE Purification Buffer F로 Day 23에 이질 세포 제거 — 37 °C 6–8분 처리 후 떠오른 이질 세포를 씻어 냅니다 (설명서)
- RPE Cryopreservation Medium G 포함 — 얻은 RPE를 동결 보관 후 해동해 성숙 배양 가능 (설명서)
구성 · 사양
| 구성품 (영문 표기) | Cat. No. | 용량 | 수량 | 보관 |
|---|---|---|---|---|
| RPE Differentiation Supplement A (50×) | RP01016-A | 800 µL | 1 | -80 °C 또는 -20 °C |
| RPE Differentiation Supplement B (50×) | RP01016-B | 1.2 mL | 1 | -80 °C 또는 -20 °C |
| RPE Differentiation Supplement C (50×) | RP01016-C | 2 mL | 1 | -80 °C 또는 -20 °C |
| RPE Differentiation Basal Medium D | RP01016-D | 100 mL | 1 | 2–8 °C |
| RPE Differentiation Basal Medium E | RP01016-E | 100 mL | 1 | 2–8 °C |
| RPE Purification Buffer F | RP01016-F | 10 mL | 1 | 2–8 °C |
| RPE Cryopreservation Medium G | RP01016-G | 10 mL | 1 | 2–8 °C |
완전 배지 A·B는 보충제 A·B + Basal Medium D, 완전 배지 C는 보충제 C + Basal Medium E로 만듭니다(설명서). 동결 RPE를 해동해 성숙 배양할 때 쓰는 RPE 성숙 배지(RP01016-H: Supplement C 2 mL, Basal Medium E 100 mL)는 설명서에 별도 품목으로 나옵니다.
| 분화 대상 | hPSC → RPE 전구세포(Day 6) → 미성숙 RPE(Day 16) → 성숙 RPE(Day 35–45) |
|---|---|
| 예상 수율 | 키트당 성숙 RPE 약 1 × 10⁷개 (설명서) |
| 순도 | MiTF+/ZO-1+ 95% 초과 (제조사 표기) |
| 분화 기질 | Matrigel (공정 모식도) |
| 표준 용기 | 12-well plate, 1 mL/well (설명서) |
사용 방법
함께 준비할 것
- NcEpic™ hPSC Medium 또는 NcTarget™ hPSC Medium — 분화 시작 전 hPSC 유지 배양용. 설명서는 Day 0에 hPSC 완전 배지(NcEpic 또는 NcTarget)를 제거하고 분화를 시작한다고 적고 있습니다. 해동 후 5계대 이상 지난 hPSC 사용 권장 (설명서).
- NcTarget™ hPSC Medium — NcEpic™ 대신 쓸 수 있는 hPSC 배지 (설명서 권장 시약)
- Corning® Matrigel® Matrix — 분화 단계 배양 기질(코팅). 키트에 없음 (설명서·공정 모식도)
- hPSC Dissociation Buffer — hPSC 계대용 (설명서 권장 시약)
- ROCK Inhibitor-Blebbistatin (10 mM) — 설명서 권장 시약
- DMEM/F12, DPBS(칼슘·마그네슘 없음) — 세척·희석용 일반 시약 (설명서)
- 0.25% Trypsin Solution · Trypsin Inhibitor (Shownin RP02011 · RP02012) — RPE 수확·동결 시 해리와 중지 (설명서 권장 시약)
- Solase — 설명서 권장 시약
- hPSC Cryopreservation Medium — hPSC 동결용 (설명서 권장 시약)
- RPE 성숙 배지 (RP01016-H) — 동결 RPE 해동 후 성숙 배양 (설명서, 별도 품목)
완전 배지 만들기
- 보충제 A, B, C를 4 °C에서 녹입니다(37 °C 금지).
- 완전 배지 A·B: Basal Medium D에 보충제 A 또는 B(50×)를 1×로. 완전 배지 C: Basal Medium E에 보충제 C(50×)를 1×로 섞습니다(예: Basal E 98 mL + 보충제 C 2 mL).
- 바로 쓰거나 4 °C에서 2주 안에 씁니다.
hPSC 준비 (Day -2)
- hPSC가 85% 차면 계대해 12-well plate에 1 × 10⁵ cells/well로 접종하고 2일 배양, 매일 배지 교체(다른 용기는 2 × 10⁴ cells/cm²).
- 5계대 이상 지나 상태가 좋은 hPSC로 분화를 시작합니다.
분화 (Day 0 ~ 23)
- Day 0–5: 완전 배지 A 1 mL/well, 매일 교체.
- Day 6–15: 완전 배지 B 1 mL/well, 매일 교체.
- Day 16–23: 완전 배지 C 1 mL/well, 매일 교체.
정제와 성숙 (Day 23 ~ 45)
- Day 23: 배지를 빼고 DPBS 1 mL/well로 1회 세척 → RPE Purification Buffer F 1 mL, 37 °C·5% CO₂에서 6–8분. 섬유아세포 모양의 이질 세포가 바닥에서 완전히 떨어지게 합니다(현미경으로 보며 손으로 살짝 흔들면 빨라짐).
- 떠오른 이질 세포를 빨아내고 DPBS 1 mL/well로 3회 씻습니다.
- 완전 배지 C 2 mL/well로 Day 35–45까지 배양, 3–4일마다 교체. 이 시기의 RPE를 연구에 씁니다.
동결과 해동
- 동결: DPBS로 세척 → 0.25% 트립신 1 mL, 37 °C 3–5분(세포 대부분이 밝게 보이면 중지) → 트립신 제거 후 트립신 억제제 1 mL, 3–5회 피펫팅 → 180 × g 5분 원심 → RPE Cryopreservation Medium G로 재부유해 예: 3 × 10⁶ cells/튜브로 동결.
- 해동: Matrigel 코팅 6-well plate 준비, RPE 성숙 완전 배지 6 mL에 Blebbistatin(10 mM) 6 µL(1:1000). 37 °C에서 1분 안에 녹이고 DMEM/F12 10 mL를 한 방울씩 넣어 180 × g 5분 원심.
- Blebbistatin이 든 성숙 배지 6 mL로 재부유해 6-well 2 well에 3 mL/well로 접종(권장 1–2 × 10⁵ cells/cm²).
- 18–24시간 뒤 교체, 이후 2일마다 3 mL/well. 해동 Day 8 무렵 전형적 RPE 형태, Day 10 무렵 멜라닌 분비가 뚜렷해집니다. 자세한 절차는 제품 설명서를 따릅니다.
| Day | -2 | 0–5 | 6–15 | 16–23 | 23 | 23–35/45 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 단계 | hPSC 접종 (1 × 10⁵ cells/well) | → Day 6 RPE 전구세포 (Pax6, Otx2, Six3) | → Day 16 미성숙 RPE (Otx2, RAX, MiTF, LHX2, TLL1) | 분화 계속 | 이질 세포 제거 (정제) | 성숙 RPE (Otx2, MiTF, RPE65, Best1, ZO-1, PEDF, MERTK) |
| 배지·시약 | NcEpic™ / NcTarget™ | 완전 배지 A (보충제 A + Basal D) | 완전 배지 B (보충제 B + Basal D) | 완전 배지 C (보충제 C + Basal E) | RPE Purification Buffer F, 37 °C 6–8분 | 완전 배지 C |
| 부피·교체 | 매일 | 1 mL/well, 매일 | 1 mL/well, 매일 | 1 mL/well, 매일 | 1 mL/well → DPBS 3회 세척 | 2 mL/well, 3–4일마다 |
| 기질 | Matrigel | Matrigel | Matrigel | Matrigel | Matrigel | Matrigel |
단계 표지자는 공정 모식도 표기입니다.
제품 설명서의 절차를 한국어로 요약했습니다. 실제 작업은 제품 설명서 원문과 소속 기관의 절차를 따르세요.
제조사 시험 자료
영문 원문 설명
Process
영문 원문 설명
A, B, C: Illustrations of cell morphology on days 6, 16 and 45 during the differentiation process of hPSC-RPE Differentiation Kit. D, E, F: Immunofluorescence detection of hPSC-RPE (Day 45) cell-specific markers MiTF and ZO-1. Scale bar: 200 μm.
제조사가 공개한 시험 결과입니다. 표시한 시료 · 조건에서 얻은 값이며, 사용하시는 세포 · 공정에서 같은 결과를 보장하지 않습니다.
보관 · 취급
- 보충제(Supplement) A–C: -80 °C 또는 -20 °C
- Basal Medium D·E, Purification Buffer F, Cryopreservation Medium G: 2–8 °C
- 만든 완전 배지는 2–8 °C(4 °C)에서 최대 2주 (설명서)
- 보충제는 4 °C에서 녹이고 37 °C에서 녹이지 않습니다. 동결·해동은 2회 이내 (설명서)
자료 · 영상
- PDFhPSC-RPE Differentiation kit — Product Manual
hPSC-망막색소상피(RPE) 분화 키트 제품 설명서(영문): 제품 정보 · 구성 · 보관 · 사용 절차.
제품 설명서 · 영문 · PDF · 6쪽 · 404 KB · PDF 작성 2026-01-16 · 공식 원문
COA(시험성적서)는 제품 라벨의 REF(품목코드) · LOT(로트)로 Shownin 공식 COA 조회에서 찾거나 비투바이오에 요청해 주세요. 모든 Shownin 자료는 Shownin 자료실에 있습니다.
인용 논문
- Transplantation of GMP-grade human iPSC-derived retinal pigment epithelialcells in rodent model- the first pre-clinical study for safety and efficacy in ChinaHang Zhang, et al. Annals of Translational Medicine, 2021
제조사가 공식 사이트에 공개한 사용 논문 목록입니다.
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