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NcMission™ M30 hMSC Medium (페놀레드 무첨가 중간엽줄기세포 배양 배지)

NcMission™ M30 hMSC Medium (Phenol Red-free) · Cat. No. SN-02-0030

NcMission™ hMSC Medium V3.0의 페놀레드 무첨가(Phenol Red-free) 버전입니다. 무혈청 조건에서 인간 중간엽줄기세포(hMSC)를 분리·배양합니다.

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개요

NcMission™ M30 hMSC Medium (Phenol Red-free)은 인간 중간엽줄기세포(hMSC) 배양용 배지로, NcMission™ hMSC Medium V3.0에서 pH 지시약인 페놀레드(phenol red)를 뺀 버전입니다.

설명서에 따르면 무혈청(serum-free)·동물 유래 성분 무첨가(animal-free) 완전 배지이며, 이 배지로 배양한 hMSC는 안정적으로 증식하고 정상적인 표면 마커 발현(CD73+/CD90+/CD105+, CD14-/CD34-/CD45-/CD79α-/HLA-DR-)과 골·연골·지방 3계통 분화능을 유지합니다.

기저 배지(Basal Medium, Phenol Red-free) 500 mL와 보충제(Supplement) 25 mL로 구성되며, 둘을 섞어 완전 배지로 사용합니다. 설명서는 탯줄 와튼 젤리(Wharton's jelly) 조직 이식편(explant) 배양법을 예시로 안내합니다.

주요 용도

  • 탯줄 와튼 젤리 등 조직에서 hMSC 1차 분리 및 배양
  • hMSC 계대 배양과 증식
  • 페놀레드가 없는 조건이 필요한 hMSC 배양

특징

  • 페놀레드 무첨가 (제품명·공식 제품 페이지)
  • 여러 조직 유래 MSC 배양에 사용 (공식 제품 페이지)
  • 세포 수확량: T175 플라스크 1개에서 2 × 10⁷ cells, 10단 세포 공장(10-layer cell factory)에서 8 × 10⁸ cells (제조사 표기, 접종 밀도·배양 기간 미기재)
  • 탯줄 1개에서 P4까지 1조(10¹²) 개 이상의 세포를 얻을 수 있다고 표기 (제조사 표기, 세부 시험 조건 미기재)
  • 와튼 젤리 0.5 g/T75 이식편 배양 시 약 12일째 2–3 × 10⁶ cells/T75 회수 (설명서)
  • 2D 배양과 3D 배양 모두에 사용, iPSC 유래 MSC(iPSC-MSC)에도 사용 (브로셔, V3.0과 공통 표기)

구성 · 사양

구성
구성품 (영문 표기)Cat. No.용량수량보관
NcMission™ M30 hMSC Medium Basal Medium (Phenol Red-free)SN-00-0003500 mL12–8 °C
NcMission™ M30 hMSC Medium SupplementSN-02-003125 mL1-80 °C 또는 -20 °C

기저 배지와 보충제를 섞어 완전 배지로 사용합니다.

형태기저 배지(페놀레드 무첨가) + 보충제 2종 구성 (공식 제품 페이지)
주요 성분 특성무혈청 · 동물 유래 성분 무첨가 · 페놀레드 무첨가 (설명서 표기)
대상 세포인간 중간엽줄기세포(hMSC)
권장 접종 밀도5000–7000 cells/cm² (권장 6000 cells/cm², 설명서)
배양 조건37 °C, 5% CO₂, 포화 습도 (설명서)

사용 방법

함께 준비할 것

  • hMSC Cryopreservation Medium — 세포 동결 시 (설명서 권장 시약)
  • 해리 용액 (hMSC Mild Digestion Solution 또는 Trypsin/Trypsin Inhibitor) — 계대 시 (설명서). 별도 준비
  • 75% 에탄올, 생리식염수, DPBS (Ca²⁺/Mg²⁺ 없음), 100 µm 세포 여과기 — 조직 처리·세포 계수용 (설명서)
  • T75/T175/T225 배양 플라스크, 15·50 mL 원심분리 튜브, 1.5·2 mL 동결 바이알, 동결 용기(Freezing Container) — 설명서 권장 소모품

완전 배지 만들기

  1. Supplement를 4 °C에서 녹입니다(37 °C에서 녹이지 않음).
  2. 생물안전작업대에서 Basal Medium (Phenol Red-free) 500 mL와 Supplement 25 mL를 섞습니다.
  3. 완전 배지는 2–8 °C에 두고 2주 안에 씁니다. Supplement를 5 mL씩 나눠 얼렸다가 Basal Medium 100 mL와 섞어 써도 됩니다(냉동·해동 2회 이내).

탯줄 와튼 젤리 이식편 배양 (설명서 예시)

  1. 탯줄은 Basal Medium에 담아 4 °C로 운반하고 24시간 안에 처리합니다.
  2. 75% 에탄올에 2분 담근 뒤 생리식염수로 2–3회 씻어 혈액을 없애고 2–3 cm 길이로 자릅니다.
  3. 정맥벽과 동맥 2개를 떼어 내고 상피가 섞이지 않게 와튼 젤리를 분리해 2–3 mm³ 크기로 잘게 자르고 무게를 잽니다.
  4. 완전 배지에 풀어 표의 양대로 플라스크에 접종하고 37 °C, 5% CO₂, 포화 습도에서 배양합니다.
  5. 5일째 첫 배지 교체, 9–10일째 두 번째 배지 교체(플라스크를 30° 세워 조직을 한쪽에 모은 뒤 상등액만 교체)를 합니다.
  6. 약 12일째 계대합니다. 와튼 젤리 0.5 g/T75에서 약 2–3 × 10⁶ cells를 얻습니다.

계대 배양 (T75 기준)

  1. 세포가 약 80–85% 컨플루언스일 때 계대합니다. 완전 배지와 hMSC Mild Digestion Solution을 실온에 맞춥니다.
  2. 배지를 빼고 DPBS(Ca²⁺/Mg²⁺ 없음)로 씻은 뒤 데운 해리 용액을 넣고 37 °C에서 4–5분 둔 다음, 같은 부피의 완전 배지로 중화하고 200 × g 5분 원심분리합니다.
  3. 생리식염수 5 mL에 풀어 100 µm 여과기로 거른 뒤 셉니다(생존율 ≥90%). 다시 200 × g 5분 원심분리합니다.
  4. 완전 배지 5 mL에 풀어 5000–7000 cells/cm²(권장 6000 cells/cm²)로 접종하고, 십자 방향으로 3번 흔들어 37 °C, 5% CO₂에서 3일 배양합니다.

해동·동결·배지 전환

  1. 해동: 37 °C 수조에서 작은 얼음 조각만 남을 때까지 녹이고, 실온 완전 배지 10 mL를 한 방울씩 넣어 200 × g 5분 원심분리한 뒤 5 mL에 풀어 셉니다.
  2. 동결: 원심분리 후 동결 배지에 일정 밀도로 풀어 프로그램 냉각 용기에 넣고 -80 °C에서 하룻밤 둔 뒤 액체질소로 옮깁니다.
  3. 다른 배지에서 옮길 때: 원래 배지로 회복·계대한 뒤 1일째에 이 배지로 바꾸면 1회 계대 후 적응합니다.
  4. 자세한 절차는 제품 설명서를 따릅니다.
이식편법 1차 분리 시 권장 사용량 (설명서 표 3)
단계T75T175T225
와튼 젤리 무게0.5 g1 g1.5 g
접종 배지10 mL15 mL20 mL
1차 배지 교체 (5일째)13 mL20 mL30 mL
2차 배지 교체 (9–10일째)15 mL25 mL35 mL
용기별 계대·배양 권장 사용량 (설명서 표 4)
용기배양 면적완전 배지해리 용액
6-well plate9.6 cm²/well2 mL/well1 mL/well
T7575 cm²15 mL4 mL
T175175 cm²25 mL8 mL
T225225 cm²35 mL10 mL

설명서 표 머리글에는 해리 용액이 'Trypsin/Trypsin Inhibitor'로 적혀 있습니다.

제품 설명서의 절차를 한국어로 요약했습니다. 실제 작업은 제품 설명서 원문과 소속 기관의 절차를 따르세요.

제조사 시험 자료

탯줄 와튼 젤리 이식편에서 hMSC가 자라 나오는 모습
탯줄 와튼 젤리 이식편에서 hMSC가 자라 나오는 모습NcMission™ M30 hMSC Medium (Phenol Red-free)으로 탯줄 유래 hMSC를 분리·배양한 모습입니다(와튼 젤리 조직 0.5 g/T75 플라스크). A, B, C: 조직을 분리해 접종한 뒤 6일, 9일, 12일째 세포 형태. Scale bar: 200 μm.시험 조건: 탯줄 와튼 젤리 0.5 g/T75 플라스크, 이식편 배양 6·9·12일째 (제조사 시험 결과)
영문 원문 설명

Illustrations for the isolation and culture of umbilical cord-derived hMSC using NcMission™ M30 hMSC Medium(Phenol Red-free) (0.5 g umbilical cord Wharton's jelly tissue/T75 culture flask) A, B, C: Cell morphology on day 6, 9, and 12 after isolation and seeding the tissue, respectively. Scale bar: 200 μm.

출처: 공식 제품 페이지

제조사가 공개한 시험 결과입니다. 표시한 시료 · 조건에서 얻은 값이며, 사용하시는 세포 · 공정에서 같은 결과를 보장하지 않습니다.

보관 · 취급

  • Basal Medium 2–8 °C, Supplement -80 °C 또는 -20 °C (공식 제품 페이지)
  • 완전 배지는 2–8 °C에서 최대 2주 보관 (공식 제품 페이지·설명서)
  • Supplement는 4 °C에서 녹이고 37 °C에서 녹이지 않습니다. 냉동·해동은 2회를 넘기지 않습니다 (설명서)

자료 · 영상

사용법 영상 (Shownin 공식 YouTube)

MSC 계대Shownin MSC Product System Usage Protocols: Passaging YouTube에서 보기

COA(시험성적서)는 제품 라벨의 REF(품목코드) · LOT(로트)로 Shownin 공식 COA 조회에서 찾거나 비투바이오에 요청해 주세요. 모든 Shownin 자료는 Shownin 자료실에 있습니다.

NcMission™ M30 hMSC Medium (Phenol Red-free) 견적 · 기술 문의

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