NkVita 면역세포 무혈청 배지

NkVita Immune Cell Serum-Free Medium · Cat. No. SN-03-0060

자가 혈장이나 혈청 대체제 없이 NK 세포를 확장하는 무혈청 배지입니다. 배지 1 L당 NK 세포 3–4 × 10⁹개 수확(제조사 표기).

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Shownin · NK · 면역세포 · 배양 배지
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개요

NkVita Immune Cell Serum-Free Medium은 Shownin Biotechnologies가 자체 개발한 사람 NK 세포 확장·배양용 무혈청 배지입니다.

Shownin NK Expansion Kit(Cat. No. RP03030)와 함께 쓰면 말초혈액과 제대혈 유래 NK 세포를 효율적으로 확장할 수 있습니다. PBMC 중 NK 세포 비율을 10%로 계산할 때 14–15일 안에 5,000–10,000배 확장되며, 확장 후 CD3⁻CD56⁺ 비율은 90%를 넘습니다(제조사 표기).

혈청이나 혈청 대체제가 들어 있지 않고, 배양 중에 자가 혈장이나 혈청 대체제를 따로 넣지 않아도 됩니다. 배지 조제 시에는 IL-2(200 IU/mL)를 더합니다(설명서).

주요 용도

  • 사람 말초혈액 유래 NK 세포의 무혈청 확장 배양
  • 사람 제대혈 유래 NK 세포의 무혈청 확장 배양
  • 신선 또는 동결 PBMC에서 시작하는 NK 세포 배양

특징

  • 무혈청 시스템: 혈청이나 혈청 대체제가 들어 있지 않습니다(제조사 표기).
  • 간단한 확장 시스템: 자가 혈장이나 혈청 대체제를 따로 넣을 필요가 없습니다(제조사 표기).
  • 높은 확장 효율: 배양 배지 1 L당 NK 세포 3–4 × 10⁹개를 수확할 수 있습니다(제조사 표기, NK Expansion Kit RP03030과 함께 사용).
  • 높은 NK 순도: 확장 후 CD3⁻CD56⁺ 비율 90% 초과, NK-MAX Purification Factor를 함께 쓰면 최대 99%(제조사 표기).
  • 말초혈액과 제대혈 시료 모두, 신선 시료와 동결 시료 모두에 쓸 수 있습니다(제조사 표기).

구성 · 사양

구성
구성품 (영문 표기)Cat. No.용량수량보관
NkVita Immune Cell Serum-Free Medium Supplement-01SN-03-0061100 µL/vial1-80 °C 또는 -20 °C
NkVita Immune Cell Serum-Free Medium Supplement-02SN-03-006240 mL/bottle1-80 °C
NkVita Immune Cell Serum-Free Medium Basal MediumSN-03-00631 L/bottle12–8 °C
구성Basal Medium 1 L + Supplement-02 40 mL + Supplement-01 100 µL
주요 성분 특성무혈청, 혈청 대체제 무첨가 (제조사 표기)
대상 세포사람 말초혈액·제대혈 유래 NK 세포 (신선·동결 시료)
순도 지표CD3⁻CD56⁺ 90% 초과 (제조사 표기)

사용 방법

함께 준비할 것

  • NK Expansion Kit (RP03030)의 NK Expansion Reagent A·B — Day 0 1차 활성화(A), Day 7 2차 활성화(B, 선택)에 사용 (설명서). 공식 페이지는 'Shownin NK Expansion Kit (Cat. No. RP03030)'와 함께 쓴다고 표기
  • IL-2 200 IU/mL — NK 확장 배지 조제 시 별도 첨가 (설명서 권장: 주사용 재조합 사람 IL-2)
  • 밀도 구배 분리액 (Ficoll) — 신선 혈액에서 PBMC 분리 (설명서)
  • T75·T175 플라스크, 림프구 배양 백 (0.2–1.8 L) — 배양 규모에 따라 (설명서 표 2·3)
  • NK-MAX Purification Factor — 선택. NK 순도를 더 높일 때 (공식 제품 페이지)

PBMC 준비 (신선 말초혈액)

  1. 자가 혈장 분리: 신선한 혈액을 900 × g에서 20분 원심분리(가속·감속 가장 느리게)한 뒤 위층 혈장을 50 mL 튜브로 옮겨 56 °C에서 30분 불활성화하고, 1200 × g에서 10분 원심분리해 침전물을 없앤 다음 4 °C에 보관합니다.
  2. PBMC 분리: 남은 혈구층을 생리식염수와 1:1로 희석해 Ficoll 위에 조심스럽게 올리고 800 × g에서 25분 원심분리합니다. 가운데 흰 층(PBMC)을 모아 생리식염수 또는 DPBS로 두 번 씻고 세포 수를 셉니다. 400 × g에서 10분 원심분리해 상층액을 버립니다.

동결 PBMC 준비 (Day -1)

  1. 동결 PBMC는 하루 전에 녹여 24시간 안정화합니다. 37 °C 수조에서 녹인 뒤, 미리 데운 NkVita Basal Medium 20 mL를 천천히 한 방울씩 넣으며 섞습니다.
  2. 300 × g에서 5분 원심분리해 상층액을 버리고, NK 확장 배지(5.1 조제)에 2 × 10⁶ cells/mL로 현탁해 플라스크에 넣고 37 °C에서 밤새 배양합니다.

NK 확장 배지 만들기

  1. NkVita Basal Medium 1 L + NkVita Supplement-02 40 mL + IL-2(200 IU/mL)를 섞습니다.

NK 세포 확장

  1. Day 0 (1차 활성화): 생존 PBMC 2 × 10⁷개(신선 또는 해동 24시간 후)를 준비합니다. NK Expansion Reagent A 1바이알을 녹여 원심분리 후 상층액을 버리고, 준비한 배지 20 mL로 현탁해 T75 플라스크에 옮깁니다. 37 °C, 5% CO₂에서 3일 배양합니다.
  2. Day 3: NK 확장 배지 10 mL를 추가합니다.
  3. Day 4–7: 배지 색과 세포 밀도를 보고 매일 배지를 더해 1.0–1.5 × 10⁶ cells/mL를 유지합니다. 전체 부피가 35 mL를 넘으면 T175 플라스크로 옮깁니다.
  4. Day 7 (2차 활성화, 선택): NK Expansion Reagent B를 녹여 처리한 뒤 배양 부피를 200 mL로 맞추고 37 °C, 5% CO₂에서 3일 배양합니다. 시료 차이가 크므로 Day 7–9에 전체 세포 수가 20배로 늘었을 때만 진행합니다.
  5. Day 8–13: 배지 추가 후 밀도가 1.0–1.5 × 10⁶ cells/mL가 되게 배지를 더합니다. 전체 부피가 200 mL를 넘으면 배양 백으로 옮기고, 이후에는 하루걸러 배지를 더합니다.
  6. Day 14–15: 세포를 수확합니다. 보통 14일 또는 15일이 적기입니다.
  7. 자세한 절차는 제품 설명서를 확인하세요.
배양 중 참고 부피 (설명서 표 3)
구분D0–D2D3D4D5D6D7D8D9D10D11D12–14
전체 부피 (mL)20305010020040010002000250030004000

용기는 T75 → T175 → 림프구 배양 백(Lymphocyte Culture Bag) 순서로 바뀝니다. 시료마다 차이가 있으므로 참고용이며, NK 세포 성장 상태와 적정 밀도를 보고 배지 양을 조절합니다(설명서). 날짜별 작업(A 첨가, 용기 이동, B 첨가, 수확) 배치는 설명서 원본 표를 확인하세요.

제품 설명서의 절차를 한국어로 요약했습니다. 실제 작업은 제품 설명서 원문과 소속 기관의 절차를 따르세요.

제조사 시험 자료

말초혈액 NK 세포 확장 모습 (PBMC D3·D5·D7)
말초혈액 NK 세포 확장 모습 (PBMC D3·D5·D7)NkVita Immune Cell Serum-Free Medium을 Shownin NK Expansion Kit(RP03030)와 함께 써서 말초혈액 NK 세포를 확장했을 때의 세포 사진입니다. 왼쪽부터 배양 3일(D3), 5일(D5), 7일(D7)이며 위·아래 두 줄로 나뉘어 있습니다. Scale bar: 200 µm.시험 조건: 시료: 말초혈액 단핵세포(PBMC) / 배양: NkVita 배지 + NK Expansion Kit (RP03030) / 관찰 시점: D3, D5, D7
영문 원문 설명

NkVita Immune Cell Serum-Free Medium, used in combination with Shownin NK Expansion Kit (RP03030), for peripheral blood NK cell expansion. Cell images are shown. Scale bar: 200 μm.

출처: 공식 제품 페이지
제대혈 NK 세포 확장 모습 (CBMC D3·D5·D7)
제대혈 NK 세포 확장 모습 (CBMC D3·D5·D7)NkVita Immune Cell Serum-Free Medium을 Shownin NK Expansion Kit(RP03030)와 함께 써서 제대혈 NK 세포를 확장했을 때의 세포 사진입니다. 왼쪽부터 배양 3일(D3), 5일(D5), 7일(D7)이며 위·아래 두 줄로 나뉘어 있습니다. Scale bar: 200 µm.시험 조건: 시료: 제대혈 단핵세포(CBMC) / 배양: NkVita 배지 + NK Expansion Kit (RP03030) / 관찰 시점: D3, D5, D7
영문 원문 설명

NkVita Immune Cell Serum-Free Medium, used in combination with Shownin NK Expansion Kit (RP03030), for umbilical cord blood NK cell expansion. Cell images are shown. Scale bar: 200 μm.

출처: 공식 제품 페이지
NK-MAX 전처리 후 확장한 NK 세포의 순도
NK-MAX 전처리 후 확장한 NK 세포의 순도NkVita Immune Cell Serum-Free Medium을 NK Expansion Kit(RP03030), NK-MAX Purification Factor(SN-03-0050)와 함께 써서 말초혈액과 제대혈 시료의 NK 세포를 확장했습니다. 순도 높은 NK 세포(CD3⁻CD56⁺ 90% 초과)를 얻을 수 있었습니다. 그림은 NK-MAX 처리 후 단핵세포(PBMC, CBMC)와 확장 후 NK 세포(PB-NK, CB-NK)의 유세포 분석(가로축 CD3, 세로축 CD56) 결과로, CD3⁻CD56⁺ 비율은 말초혈액 Donor 2 확장 후 97.79%, 제대혈 Donor 1 확장 후 94.45%입니다.시험 조건: 시료: 말초혈액(Donor 2), 제대혈(Donor 1), 각 1명 / 처리: NK-MAX Purification Factor 전처리 / 배양: NkVita 배지 + NK Expansion Kit (RP03030) / 분석: 유세포 분석 CD3-PC5.5, CD56-APC (확장 일수 미기재)
영문 원문 설명

NkVita Immune Cell Serum-Free Medium, used in combination with NK Expansion Kit (RP03030) and NK-MAX Purification Factor (SN-03-0050), for NK cell expansion from peripheral blood and umbilical cord blood samples. High purity NK cells (CD3-CD56+ > 90%) can be harvested.

출처: 공식 제품 페이지

제조사가 공개한 시험 결과입니다. 표시한 시료 · 조건에서 얻은 값이며, 사용하시는 세포 · 공정에서 같은 결과를 보장하지 않습니다.

보관 · 취급

  • Supplement-01: -80 °C 또는 -20 °C
  • Supplement-02: -80 °C
  • Basal Medium: 2–8 °C

자료 · 영상

COA(시험성적서)는 제품 라벨의 REF(품목코드) · LOT(로트)로 Shownin 공식 COA 조회에서 찾거나 비투바이오에 요청해 주세요. 모든 Shownin 자료는 Shownin 자료실에 있습니다.

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